Single Cell Transfektion in Hühnerembryonen
Summary
Mit feiner Spitze Mikropipetten spritzen wir Plasmid-DNA in Subdomains Huhn Somiten oder neuronale Röhren. Die Konzentration der Plasmid wird angepasst, um einzelne transfizierten Zellen zu generieren. Dann erlauben wir die Zellen in klonalen Populationen zu entwickeln.
Abstract
Ein zentrales Thema in der Entwicklungsbiologie ist die Diversifizierung der Linien und die Aufklärung der zugrunde liegenden molekularen Mechanismen. Dies erfordert eine gründliche Analyse der Schicksale der einzelnen Zellen unter normalen und experimentellen Bedingungen. Zu diesem Zweck sind die Transfektion Methoden, die einzigen Vorfahren Ziel eine Voraussetzung. Wir beschreiben hier eine technisch einfache Methode zur Transfektion von einzelnen Zellen in Hühner-Gewebe in-ovo, so dass verlässliche Linie Tracing sowie Genmanipulation. Spezielle Gewebe-Domains werden innerhalb der Somiten oder Neuralrohr gezielte und DNA wird direkt in das Epithel des Interesses injiziert, was zu sporadischen Transfektion von Einzelzellen. Mit den Reportern können klonalen Populationen damit für zurückverfolgt werden bis zu drei Tage, und das Verhalten von genetisch manipulierten klonalen Populationen können mit der Kontrollgruppen verglichen werden. Diese Methode nutzt die Zugänglichkeit der Hühnerembryo mit neuen Tools zur genetischen Manipulation. Wir vergleichen und diskutieren ihre Vorteile gegenüber den weit verbreiteten Methode der Elektroporation und mögliche Anwendungen und den Einsatz in weiteren in-vivo-Modelle sind ebenfalls vorgeschlagen. Wir befürworten die Verwendung dieser Methode als eine wichtige Ergänzung und Ergänzung für bestehende Linie Tracing und genetischen Störungen Werkzeuge.
Protocol
Discussion
Das oben beschriebene Verfahren ist eine Abwandlung eines zuvor beschriebenen Technik für die Bereitstellung von lipophilen Farbstoffen kleinzelligem Teilmengen oder einzelne Vorläuferzellen 3. Es hat drei wesentliche Vorteile gegenüber den Standard-Elektroporation Technik. Erstens bietet es ein Mittel zur Kennzeichnung mit Zuversicht diskreten Stellen in Zielgeweben, so dass viel größere räumliche Auflösung als Elektroporation (siehe z. B. Abbildung 1B, C). Zweitens erlaubt es die Kennzeichnung von ei…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir danken Shlomi Krispin für das Neuralrohr Bild. Insbesondere anerkennen wir Yuval Zimt für die Einleitung des GFP Transfektion Technik. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der Israel Science Foundation, Association Francaise contre les Myopathien und Deutche Forschungsgemeinshaft, SFB 488 bis CK unterstützt
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipette tubes | Sutter Instrument | B100-75-10 | ||
| Capillaries | Drummond Scientific | 2-000-100 | ||
| Insect needles | Watkins & Doncaster | E6871 | ||
| Pen-Strep solution | Biological Industries | 03-031-1B |
References
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