एडिनो - जुड़े वायरल vectors के intracranial इंजेक्शन
Summary
यहाँ हम दृश्य प्रांतस्था में न्यूरॉन्स और glia के फ्लोरोसेंट लेबलिंग के लिए AAV वैक्टर intracranial इंजेक्शन उपस्थित थे.
Abstract
वायरल के लिए एक फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त इंजीनियर वैक्टर intracranial इंजेक्शन दोनों vivo में और मस्तिष्क वर्गों में अलग मस्तिष्क क्षेत्रों में कोशिकाओं के विशिष्ट सबसेट के दृश्य के लिए एक बहुमुखी लेबलिंग तकनीक है. फ्लोरोसेंट रंजक के इंजेक्शन के विपरीत, वायरल लेबलिंग अलग – अलग सेल प्रकार का लक्ष्य प्रदान करता है और कम खर्चीला और समय ट्रांसजेनिक माउस लाइनों की स्थापना की तुलना में काफ़ी है. इस तकनीक में एक एडिनो जुड़े वायरल सदिश (AAV) intracranially आसपास के ऊतकों को न्यूनतम क्षति के साथ वांछित क्षेत्र में stereotaxic निर्देशांक, एक micropipette और AAV की सटीक प्रसव के लिए एक स्वचालित पंप का उपयोग करने के लिए अंतःक्षिप्त है. इंजेक्शन मापदंडों इंजेक्शन के इंजेक्शन, इंजेक्शन स्थान, इंजेक्शन की मात्रा, दर, AAV सीरोटाइप और जीन अभिव्यक्ति ड्राइविंग प्रमोटर जानवरों की उम्र का समायोजन करके अलग – अलग प्रयोगों के लिए सिलवाया किया जा सकता है. चुना शर्तों पर निर्भर करता है, virally प्रेरित transgene अभिव्यक्ति कोशिकाओं, व्यक्तिगत कोशिकाओं या ठीक सेलुलर प्रक्रियाओं के समूहों के दृश्य, वृक्ष के समान spines के स्तर के नीचे की अनुमति कर सकते हैं. यहाँ दिखाया प्रयोग डबल असहाय AAV माउस प्राथमिक दृश्य प्रांतस्था में न्यूरॉन्स और glia की लेबलिंग के लिए हरे रंग का फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त का एक इंजेक्शन दर्शाया गया है.
Protocol
Discussion
Virally की मध्यस्थता जीन डिलीवरी स्नायविक प्रक्रियाओं और मस्तिष्क 1,2,3 विकारों के उपचार के अध्ययन के लिए महान क्षमता रखती है . इस तकनीक के महान बहुमुखी प्रतिभा भी fluorescently दोनों इन विट्रो में और vivo में …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम (EY012977) एनआईएच, Burroughs Wellcome कोष, व्हाइटहॉल फाउंडेशन, और स्लोअन फाउंडेशन (AKM) से जैव चिकित्सा विज्ञान में एक कैरियर पुरस्कार से अनुदान द्वारा संभव बनाया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stoelting Mouse and Neonatal Rat Adaptor | Stoelting | 51625 | Regular stereotax for securing animals for surgery may be substituted | |
| Extra Fine Bonn Scissors, 8.5cm, straight tip, cutting edge 13mm | Fine Science Tools | 14084-08 | ||
| Eye Dressing Forceps, 10cm, tip width 0.5mm, curved | Fine Science Tools | 11152-10 | ||
| Dumont #5/45 Forceps- Dumoxel Standard Tip, 11cm, angled | Fine Science Tools | 11251-35 | Extra-fine tipped forceps for performing craniotomy | |
| Standard Pattern Forceps, straight, 2.5mmx1.35mmtip, 12cm | Fine Science Tools | 11000-12 | ||
| Microtorque Control Box and Tech2000 handpiece | Ram Products, Inc. | TECH2000ON/OFF | Dental drill | |
| Micro Drill Stainless Steel Burrs 1.4mm tip diameter | Fine Science Tools | 19008-14 | ||
| Wiretrol micropipettes, to deliver 1-5 Ul | VWR International/ Drummond | 5-000-1001 or 53480-287 | ||
| Mineral oil | VWR International | 29447-338 | ||
| Manual Micromanipulator and Tilting Base (right-handed) | World Precision Instruments, Inc. | M3301-M3-R | Used for determining stereotaxic co-ordinates | |
| UltraMicroPump (UMP3) (one) with SYS-Micro4 Controller | World Precision Instruments, Inc. | UMP3-1 | ||
| Sutures | VWR International | 95056-952 | ||
| P-97 Flaming/Brown Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Tobradex | Available from your institution’s veterinary services |
References
- Kaplitt, M. G., Leone, P., Samulski, R. J., Xiao, X., Pfaff, D. W., O’Malley, K. L., During, M. J. Long-term gene expression and phenotypic correction using adeno-associated virus vectors in the mammalian brain. Nat Genet. 8, 148-154 (1994).
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