الكشف عن نشاط تنظيم سياليداز Neu1 في اتصال مثل تنشيط مستقبلات
Summary
في مقايسة سياليداز هو نهج بسيط التقنية التي من شأنها توضيح الآلية الجزيئية رواية (ق) من أجهزة الاستشعار من العدوى الميكروبية TLR والمشاركة في الأمراض الالتهابية على مستوى المستقبلات على سطح الخلية الحية الضامة.
Abstract
الثدييات مثل مستقبلات تول (TLRs) هي عائلة من المستقبلات التي تعترف الممرض المرتبطة بأنماط الجزيئية. لا يقتصر الأمر على أجهزة استشعار TLRs الحاسم الجرثومية (مثل الفيروسات والبكتيريا والطفيليات) التهابات ، وأنها تلعب أيضا دورا مهما في الفيزيولوجيا المرضية للأمراض المعدية ، والأمراض الالتهابية ، وربما في أمراض المناعة الذاتية. وبالتالي ، يجب أن تكون شدة ومدة ردود TLR ضد الأمراض المعدية لرقابة مشددة. ويترتب على ذلك فهم السلامة الهيكلية للاستشعار مستقبلات ، والتفاعلات يجند ومكوناتها يشير أمر ضروري لحماية مناعية لاحقة. كما أنه سيوفر فرصا هامة لتعديل المرض من خلال التلاعب الاستشعار. على الرغم من أن تتميز كذلك مسارات إشارات من أجهزة الاستشعار TLR ، المعلمات السيطرة على التفاعلات بين أجهزة الاستشعار ويغاندس التي ما زالت تبقى محددة بشكل واضح. حددنا مؤخرا آلية جديدة لتفعيل TLR التي يجند لها الطبيعية ، التي لم وحظ سابقا 1،2. فإنه يشير إلى أن يجند لرقابة مشددة من صنع TLR التنشيط من خلال تفعيل سياليداز Neu1. وذكرت أيضا أن علينا Neu1 ينظم بإحكام مثل مستقبلات neurotrophin TrkA وTrkB 3 ، والتي تنطوي Neu1 ومصفوفة الفلزي – 9 (MMP – 9) عبر الحديث في مجمع مع المستقبلات 4. وقد تم استخدام مقايسة سياليداز البداية لايجاد يجند رواية ، thymoquinone ، في تفعيل Neu4 سياليداز على سطح الخلية الضامة ، والخلايا الجذعية ، والخلايا الليفية عبر البروتينات Gαi النوع من الاختزال و 5 MMP – 9. لمستقبلات TLR ، البيانات المتوفرة لدينا تشير إلى أن Neu1 سياليداز بالفعل في مجمع مع مستقبلات TLR – 2 ، -3 -4 و، والتي يسببها بناء يجند ملزم لمستقبلات سواء. تنشيط hydrolyzes سياليداز Neu1 sialyl α ،3 – 2 – β مرتبطة galactosyl المخلفات بعيدة عن يجند ملزم لإزالة عوائق الفراغية لdimerization TLR – 4 ، MyD88/TLR4 التوظيف المعقدة ، والاستجابات NFkB تنشيط الخلايا الموالية للالتهابات. في تقرير التعاونية ، وقد تبين Neu1 سياليداز لتنظيم خلايا البلاعم في البلعمة 6. أخذت معا ، وفرت لنا مقايسة سياليداز مع رؤى قوية لتفعيل الآليات الجزيئية التي يسببها مستقبلات يجند. على الرغم من أن العلاقة الدقيقة بين Neu1 سياليداز وتفعيل TLR ، تورك مستقبلات لم يتم بعد توضيح بشكل كامل ، فإنه يمثل نهجا جديدا أو رائدة لتنظيم مسارات الخلية.
Protocol
Discussion
باستخدام مقايسة وضعت حديثا للكشف عن النشاط في خلايا البلاعم سياليداز يعيش 2 ، استخدمنا هذه التكنولوجيا للكشف عن النشاط سياليداز في النشاط سياليداز يجند التي يسببها العيش في BMC – 2 خلايا البلاعم بطريقة تعتمد على الجرعة وكذلك في حي DC – 2.4 الخلايا الجذعية ، HEK-TLR4/MD2 ، H…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الدعم الجزئي عن طريق المنح لMRS هو من العلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث كندا (NSERC) ، وهاري Botterell مؤسسة للأبحاث العلوم العصبية ، مركز البحوث الزراعية ، وأبحاث القلب والأوعية الدموية وكيلي غارفيلد صندوق التنمية. SRA هي المستفيدة من جائزة الملكة أبحاث الجامعة وجيه روبرت ويلسون زمالة. PJ هي المستفيدة من جائزة الملكة عليا وجيه روبرت ويلسون زمالة. AG وSA يتلقون جائزة الملكة عليا. وكان سادس المستفيدة من المنح الدراسية العليا في أونتاريو في العلوم والتكنولوجيا (OGSST). AG هو المستفيد من الملكة فرانكلين منحة دراسات عليا السرخس. SA هو المستفيد من الملكة RS منحة دراسات عليا ماكلولين.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco, Rockville, MD | |||
| 4-MUNANA | Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA | |||
| Fetal calf serum | HyClone, Logan, Utah, USA | |||
| DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media | DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA | S3023 | 15 mL | |
| Tamiflu (Oseltamivir Phosphate) | Hoffman La Roche |
References
- Amith, S. R. Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling. Cell Signal. 22, 314-324 (2010).
- Amith, S. R. Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase. Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).
- Woronowicz, A. Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase. Glycobiology. 17, 10-24 (2007).
- Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling. Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).
- Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR Gαi proteins and matrix metalloproteinase-9. Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).
- Seyrantepe, V. Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1. Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).
