Immünkompetan Fare Seröz Yumurtalık Kanseri bir Ortotopik Model In vivo Tümör Görüntüleme ve İzleme
Summary
Çalışmak için<em> In vivo</em> Tümör büyümesi ve tümör mikroçevresinin, immünkompetan hayvanlarda yumurtalık kanseri singeneik ve ortotopik bir fare modeli kullandı. Biz Katushka floresan protein (MOV1 bir fare tümör hücre hattı (MOV1) transduced<sup> KAT</sup>) Ve burada over ortotopik implantasyon göstermek ve<em> In vivo</em> Görüntüleme.
Abstract
Amaç: Over kanseri, genellikle durumunda / ölüm oranı yüksek bir ileri evrede teşhis ve böylece ABD kadınların 1,2,3 arasındaki tüm jinekolojik maligniteler en ölümcül kalır . Seröz tümörler, yumurtalık kanserinin en yaygın biçimlerinden ve 4,5 Tg-MISIIR-Tag transgenik Bu tip tümörlerin kendiliğinden gelişen tek bir fare modeli temsil eder. Müllerian İnhibitör Madde tip II Reseptör (MISIIR) gen promoter 6 kontrolü altında tg-MISIIR-Tag farelerde ifade SV40 dönüştürerek bölge. Ek transgenik çizgilerle ifade SV40 etiketi transgen tespit edilmiştir, ancak yumurtalık tümörlerinin ortaya çıkmaz. Sigara tümör eğilimli fareler C57BL / 6 fareler için tipik ömrü sergi ve verimli. Bu fareler Tg-MISIIR-TAG-DR26 fareler izole tümör hücreleri için singeneik allogreft alıcısı olarak kullanılabilir.
Amaç: tümör görüntüleme 7 mümkün olsa da, derin tümörleri erken teşhis küçük canlı hayvanlar zorlu. Seröz over kanseri için immünolojik sağlam bir hayvan modelinde preklinik çalışmalarda etkinleştirmek için, in vivo görüntüleme, tümör mikroçevresinin ve tümör immün yanıtları çalışmaları izinleri yumurtalık kanseri bu tip bir singeneik fare modeli açıklanmaktadır .
Yöntem: Biz ilk kez bir 26 hafta eski DR26 Tg-MISIIR-Tag bayan hasat spontan yumurtalık tümörü bir etiket + fare kanser hücre hattı (MOV1) türetilmiştir. Sonra, biz stably Katushka kodlar TurboFP635 lentivirüs memeli vektörü, uyarma / 588 / 635 nm 8,9,10 emisyon maxima ile deniz anemon Entacmaea quadricolor kırmızı floresan proteini çok kırmızı mutant MOV1 hücreleri transduced. Biz orthotopically olmayan tümör eğilimli Tg-MISIIR-Tag dişi farelerde yumurtalık 11,12,13,14 MOV1 Kat implante. Tümör ilerlemesi in vivo optik görüntüleme ve tümör mikroçevresinin immünohistokimyasal analiz edildi izledi.
Sonuçlar: Orthotopically MOV1 Kat hücreler implante seröz over tümörleri geliştirdi. MOV1 Kat tümörler insan over kanseri, 15 (Şekil 2) görüldüğü gibi, üç hafta sonra (Şekil 1) implantasyonu in vivo görüntüleme tarafından görüntülenmiştir olabilir ve lökosit ile infiltre edildi .
Sonuç: Biz derin dokularda pH istikrarı ve yüksek Katushka, fotostabilite nedeniyle erken tümörlerin in vivo görüntüleme için uygun yumurtalık kanseri ortotopik modeli tarif. Tümör immün yanıtları ve Tedaviler in vivo görüntüleme çalışmaları ve izleme için bu romanı seröz over kanseri singeneik modeli öneriyoruz.
Protocol
Discussion
Cerrahi ve Ortotopik enjeksiyonları
Over bursa Ortotopik enjeksiyon eğitim ve hassasiyet gerektirir. Böylece
- Ilk kadavra yoksul cerrahi deneyim, pratik durumda.
- Nullipar kadın ile karşılaştırmak için, enjeksiyon ve artış hayatta kalma kolaylaştıran, zaman içinde büyük yumurtalıklar gelişir tercihen multipar kadın (bir ya da iki litre) kullanın.
- Fare over bursa küçük boyutları nedeniyle, küçük iğne boyutu kullanımı kesinlikle teşvi…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
NIH hibe P01 AI 068.730 (SNC, NS), NIH hibe CA016520 / TAPITMAT (NS), özel finansman Claneil Vakfı (NS), yumurtalık ve FCCC ve Pennsylvania Üniversitesi SPOR hibe (Bu çalışma tarafından desteklenmiştir. P50 CA83638) ve Fox Chase Kanser Merkezi'nde Çekirdek Grant (P30 CA06927) (DCC). Yazarlar Dr. EJ Delikatny yönettiği, Anthony Secreto Pennsylvania Üniversitesi, Pennsylvania Kanser Üniversitesi, Dr. G. Danet-Desnoyers yönettiği Kök Hücre ve Xenograftlarında Çekirdek Optik / Biyoparlaklık Çekirdek Tesisi mükemmel teknik yardım teşekkür ederim Pennsylvania / OCRC Üniversitesi'nde ameliyat yardımcı ortotopik enjeksiyon tekniği ve Denada Dangaj eğitim SNC Merkezi.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM-GLUTAMAX | Invitrogen | 10564-011 | ||
| PBS | Gibco | 14040 | ||
| Versene | Lonza | 17-711E | ||
| Heating pad | Deltaphase | 39 DP | ||
| Povidone pads | Dynarex | 1108 | ||
| Alcohol pads | Fisher | 06-669-62 | ||
| Artificial tears ointment | Phoenix Pharma., Inc. | 17845-153 | ||
| Ketoprofen | Fort Dodge laboratories | |||
| 3cc/insulin syringe | BD | 309301 | ||
| Polyg Polyglycolic Acid suture/needle (3/8 19mm) | Syneture | 9612-31 | ||
| Tissue adhesive | Vetbond | 3M | ||
| Vet Bactrim/ oral suspension | Hi-tech Pharmacal | 840823 | ||
| IVIS-Lumina | Caliper lifesciences | |||
| Isofluorane | Phoenix Pharma., Inc. | J108013 | ||
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Invitrogen | 10437036 | ||
| Penicillin/streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| TurboFP635 mammalian vector | Evrogen | FP721 | ||
| T175 flasks | cellstar | 660-190 |
References
- Etzioni, R., et al. The case for early detection. Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).
- Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet. Future Medicine. 3, 275-288 (2009).
- Anderson, G. L., et al. Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study. J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).
- Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).
- Dubeau, L. The cell of origin of ovarian epithelial tumours. Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).
- Connolly, D. C., et al. Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer. Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).
- Hensley, H., et al. Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer. Cancer Biol Ther. 6, (2007).
- Deliolanis, N. C., et al. Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications. J Biomed Opt. 13, (2008).
- Hoffman, R. M. A better fluorescent protein for whole-body imaging. Trends Biotechnol. 26, (2008).
- Shcherbo, D., et al. far-red fluorescent protein for whole-body imaging. Nat Methods. 4, 741-746 (2007).
- Fu, X., Hoffman, R. M. Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens. Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).
- Kiguchi, K., et al. A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer. Clinical & experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).
- Bao, R., et al. Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter. J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).
- Connolly, D. C., Hensley, H. H. Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45. , 1-36 .
- Milne, K., et al. Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors. , (2009).
