ड्रोसोफिला लारवल कमानी axons के भीतर Synaptic vesicles के vivo विज़ुअलाइज़ेशन
Summary
इस प्रोटोकॉल का जीना विच्छेदन चर्चा<em> ड्रोसोफिला</em> इमेजिंग GFP microtubule पटरियों पर टैग axonal vesicles के आंदोलन के प्रयोजन के लिए लार्वा.
Abstract
Axonal परिवहन के तंत्र elucidating निर्धारण कैसे लंबी दूरी की परिवहन में दोष अलग स्नायविक रोगों को प्रभावित करने में बहुत महत्वपूर्ण हो दिखाया गया है. यह आवश्यक प्रक्रिया में दोष neuronal कामकाज और विकास पर हानिकारक प्रभाव हो सकता है. हम एक विच्छेदन प्रोटोकॉल को बेनकाब करने के लिए डिज़ाइन किया गया है विकसित किया है<em> ड्रोसोफिला</em> लार्वा कमानी axonal परिवहन के लिए वास्तविक समय में देखने नसों. हम हर्ड और Saxton (1996) लार्वा कमानी नसों के immunolocalizatin के लिए प्रयोग किया जाता द्वारा प्रकाशित एक से रहते इमेजिंग के लिए इस प्रोटोकॉल के अनुकूल है. सावधानी से विच्छेदन और उचित बफर शर्तों dissected लार्वा के जीवन को अधिकतम करने के लिए महत्वपूर्ण हैं. जब ठीक से किया, dissected लार्वा शारीरिक शर्तों के तहत 2-3 घंटे के लिए मजबूत पुटिका परिवहन दिखाया गया है. हम विधि यूएएस GAL4 का उपयोग करें<sup> 1</sup> व्यक्त करने के लिए GFP-टैग के भीतर अलग neuronal GAL4 ड्राइवरों का उपयोग करके एक एकल या लार्वा कमानी नसों में अक्षतंतु कई axons एपीपी या synaptotagmin vesicles. अन्य मार्करों fluorescently टैग, उदाहरण के लिए (MitoTracker) mitochrondria या lysosomes (LysoTracker), यह भी देखने से पहले लार्वा को लागू किया जा सकता है. GFP पुटिका आंदोलन और कण आंदोलन एक साथ अलग तरंगदैर्य का उपयोग कर देखा जा सकता है है.
Protocol
Discussion
ड्रोसोफिला लार्वा कमानी नसों के भीतर synaptic पुटिका परिवहन के vivo इमेजिंग में axonal परिवहन तंत्र के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है . हम पहले इस प्रोटोकॉल का उपयोग किया है लार्वा विस्तार polyQ दोहरात…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
एसजी से भैंस पर न्यूयॉर्क के राज्य विश्वविद्यालय और जॉन आर Oishei फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित है.
एम यूबी पर एक छात्र CURCA द्वारा अनुसंधान पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Génétique. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
