Immunocompromised चूहे में intracranial medulloblastoma कक्ष के Orthotopic Allografting
Summary
इस प्रोटोकॉल अलगाव और माउस medulloblastoma ऊतक के पृथक्करण का वर्णन है, और immunocompromised प्राप्तकर्ता चूहों में ट्यूमर कोशिकाओं के बाद allografting क्रम में माध्यमिक medulloblastoma आरंभ.
Abstract
Medulloblastoma तंत्रिका तंत्र की सबसे आम बाल चिकित्सा ट्यूमर है. जानवरों के अध्ययन का एक बड़ा शरीर 1-4 medulloblastoma के लिए सेल के मूल के रूप में अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन व्यापारियों (CGNPs) पर ध्यान केंद्रित किया है. हालांकि, मानव (गांठदार, desmoplastic, शास्त्रीय और बड़े / सेल anaplastic) रोगियों, और तथ्य यह है कि medulloblastoma CGNP 5 मार्कर का कोई अस्थानिक अभिव्यक्ति के साथ मानव रोगियों के एक सबसेट में पाया जाता है, में medulloblastoma subtypes के विविध नैदानिक प्रस्तुतियों सुझाव है कि medulloblastoma के सेलुलर और आणविक मूल और अधिक जटिल और पूरी तरह से deciphered किया जा रहा से दूर कर रहे हैं. इसलिए, यह निर्धारित करने के लिए आवश्यक है कि क्या वहाँ एक वैकल्पिक medulloblastoma ट्यूमर कोशिका के मूल सेल प्रकार जो विशिष्ट उपचारात्मक साधन विकसित किया जा सकता है आधारित है. यह अंत करने के लिए, आनुवंशिक चिह्नित ट्यूमर कोशिका प्रकार प्राप्तकर्ताओं में माध्यमिक ट्यूमर के विकास के बाद के विश्लेषण के द्वारा पीछा किया intracranial allografting orthotopic ट्यूमर की शुरुआत कोशिकाओं के सेलुलर मूल के निर्धारण की अनुमति देगा. यहाँ हम intracranial medulloblastoma प्राथमिक ट्यूमर ऊतकों से निकाली गई कोशिकाओं के allografting orthotopic के लिए प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का वर्णन है, और इस प्रक्रिया को भी स्थापित सेल लाइनों से कोशिकाओं के प्रत्यारोपण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
कई महत्वपूर्ण कारकों सफल medulloblastoma सेल allografting है कि पैदावार माध्यमिक ट्यूमर गठन निम्नानुसार हैं सुनिश्चित: पहले, ऊतक हदबंदी के लिए केवल 50% Accutase का उपयोग करें और ऊतकों से अधिक को पचाने के रूप में लंबे समय तक एंज?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन Vanderbilt-Ingram कैंसर केंद्र सहायता अनुदान (CA068485 p30), बचपन ब्रेन ट्यूमर फाउंडेशन और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (NS042205) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Neurobasal medium | Invitrogen | 21103049 | ||
| hEGF | Invitrogen | PHG0311 | 25ng/ml | |
| bFGF | Invitrogen | PHG0023 | 25ng/ml | |
| N2 | Invitrogen | 17502048 | 1X | |
| B27(-RA) | Invitrogen | 12587010 | 1X | |
| Accutase | Invitrogen | A1110501 | 50% | |
| Glutamine | Invitrogen | 25030081 | 2mM | |
| Stereotaxic instrument | Stoelting | 51730 | ||
| Foredom flexible shaft drill, hang-up style | Stoelting | 58650 | ||
| Large probe holder | Stoelting | 51633 | ||
| 10 μL syringe, 26 ga., bevel tip | Stoelting | 51105 | ||
| Drill bit .75mm | Stoelting | 51455-3 |
References
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- Yang, Z. J. Medulloblastoma can be initiated by deletion of Patched in lineage-restricted progenitors or stem cells. Cancer Cell. 14, 135-145 (2008).
- Kessler, J. D. N-myc alters the fate of preneoplastic cells in a mouse model of medulloblastoma. Genes Dev. 23, 157-170 (2009).
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