アン EX - OVOニワトリ胚培養システム
Summary
この記事では、我々は長期的な有効にするシンプルな方法論を提示<em> EX – OVO</em>鳥類の胚培養。この手法は、鳥類胚における完全な光のアクセシビリティおよび/または無菌輸送を必要とする縦の実験に最適です。
Abstract
正常と不正な形式の胚発生を促進遺伝子と微環境要因間の関係を理解することは新たな治療戦略を発見するための基本です。イメージング技術の進歩は、身体の計画の組織と成熟の定量的な調査を有効にしているが、後の段階の胚の形態形成にはあまり明確ではない。ニワトリ胚のための文化と手術操作の容易さのこのアプリケーションのための魅力的な脊椎動物の動物モデル系です。初期胚は、細胞のパターニングと運命学の1,2のための完全な光アクセスを可能にするろ紙のリング、上に短い時間のために培養することができる。このような心臓の形態形成などの勉強を高度な発達過程は伝統的に卵殻3-5の窓を通して行われますが、この手法は、ウィンドウのサイズに起因する光アクセスを制限している。我々は以前までの超音波検査6,7を経由して高分解能のイメージングを有効にして10日間、にのために六角形の重船の文化胚EX – OVO全体を簡単に計測する手法を開発した。これらの文化は、ライブの実験で使用可能なイメージングツールの種類を制限する、輸送することが困難でした。ここでは、費用対効果の高い、ポータブル環境室との改善されたシェルレス培養系を提示する。卵は、部分的に滅菌水で満たされたプラスチック製のコップに円周方向に貼付ポリウレタン膜（ラップしがみつく）によって作成されたハンモックに割れていた。ハンモックと水の下の力学が輸送によって誘発される振動を減衰させる助けながら、ハンモックの円周と深さの寸法は、両方の表面張力を維持するために重要でした。水浴を循環させ、小さなフットプリントは、実験中に連続的な温度制御を可能にするために開発されました。我々は、形態形成の欠陥または遅滞なく、少なくとも14日間この方法における培養胚に能力を発揮し、いくつかの顕微およびイメージングアプリケーションでこのシステムを採用しています。
Protocol
Discussion
光アクセスと鳥類の胚の実験は、卵の殻の制約のため困難である。のウィンドウが大幅に注入し、顕微鏡を使った手術のアプローチ8のアクセス可能な微小血管の数を制限します。結果としてのみ初期胚を操作して連続観測が不可能であることができる。長期的な文化9を防止胚での表面張力の不十分な制御のためのペトリ皿を使用して初期のEX – OVOの文化は、使用が制?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fertile white Leghorn chicken eggs | ||||
| Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO | ||||
| Saran Wrap | ||||
| Kimwipes | Kimberly-Clark, Inc. | |||
| Rubber bands | ||||
| Warm sterile water | ||||
| 9 oz plastic cup | ||||
| 100 mm diameter Petri dish | ||||
| 1602N thermal air | GQF Manufacturing CO, Savannah GA | |||
| Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline) | Sigma Aldrich Inc. | |||
| Microforge | Glassworx, Inc, St Louis MO | |||
| Glass capillary tubes (0.75 mm ID) | ||||
| Micromanipulator | World Precision Instruments, Sarasota FL | Model M3301L | ||
| Fluorescent microscopy | Zeiss | Z20 | ||
| Fine 55-forceps | World Precision Instruments, Sarasota FL | |||
| 10-0 nylon surgical suture | Ethicon | |||
| Tubing | VWR | 1mm OD | ||
| 3 mL syringe | BD | |||
| 200 μL pipetter and pipette tips | VWR |
References
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