Всего техника культуре эмбрионов позволяет мыши культуры и крысиных эмбрионов<em> Исключая виво</em> Состоянии в течение ограниченного периода соответствующее середине беременности этапов. В этом видео-протокол, мы демонстрируем наши стандартные процедуры крысы целая культура эмбриона после E12.5 использовании поворотного устройства типа бутылки системе культуры.
Всего культивирования эмбрионов (ВЭС) методика была разработана в 1950 году по количеству новых и его коллегами, и применяется для биологии развития 1. Хотя развитие и рост эмбрионов млекопитающих критически зависят от функции плаценты, ВЭС техника позволяет мыши культуры и крысиных эмбрионов бывших естественных условиях в течение ограниченного периода соответствующее середине беременности этапах эмбрионального день (E) 6,5-E12.5 в мышь или E8.5-E14.5 у крыс 2, 3, 4. В ВЭС, мы можем непосредственно целевой требуемых областях эмбрионов с использованием тонких стеклянных капилляров, поскольку эмбрионы можно управлять под микроскопом. Таким образом, грызунов ВЭС очень полезный метод, когда мы хотим для изучения динамических процессов развития в postimplanted эмбрионов млекопитающих. На сегодняшний день, несколько видов ВЭС системы были разработаны 1. Среди тех, поворотное устройство типа бутылки культуре системы наиболее популярны и подходят для долгосрочных культуры эмбрионов в середине беременности, т. е. после E9.5 и E11.5 у мышей и крыс, соответственно 1. В этом видео-протокол, мы демонстрируем наши стандартные процедуры крысы ВЭС после E12.5 использованием изысканные модели оригинального поворотного устройства системы, который был разработан новый и 5 Кокрофт, 6, и внедрить различные приложения ВЭС технику для исследований в развитии млекопитающих биологии.
Есть два важных шагов в грызун ВЭС для успеха. Во-первых, процедура вскрытия должна быть точной, чтобы не повредить эмбрионов, особенно кровеносные сосуды. Во-вторых, процедура должна быть как можно быстрее, потому что кислород и питательные больше не поставляется через плаценту после в…
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим г-н Хадзимэ Ichijo для видео-записи и полезные советы для редактирования видео. Мы также благодарим Drs.Yuji Tsunekawa и кайчи Yoshizaki за добрые помощник для видео-записи. Эта работа проводится при поддержке KAKENHI на молодых ученых и B в приоритетных областях,-молекулярной наук о мозге от MEXT Японии. Мы признаем, поддержке Глобального COE Программа «Базовые и трансляционных исследований Центра глобального науке мозга" от MEXT Японии и основной исследовательской эволюционной науки и техники (CREST) от японской науки и техники от японской корпорации науки и техники агентство (JST) .
Name | Type | Company | Catalog Number | Comment |
Setting up WEC | ||||
WEC system (10-0310) | Tool | Ikemoto Rika | 010-0310 | Another small model is also available. |
Silicon plug without a hole | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-08 | |
Gas mixture cylinder | Tool | Nikko Sanso | – | Containing 95% oxygen & 5% carbon dioxide. Custom order. |
Gas regulator | Tool | Ono Seisakusho | WR-11 | |
0.22 μm filter Millex GS | Tool | Millipore | SLGS033SS | |
Anesthesia and isolation of the uterus | ||||
Large scissors | Tool | Napox | B-7H | |
Forceps | Tool | Napox | A-3-2 | |
Disposal Petri dish (90 mm x 15 mm) |
Tool | Iwaki | SH90-15 | Deep-type dish is the best for dissection. |
Isoflurane | Reagent | Abbott | B506 | For anesthesia |
Pentobarbital sodium | Reagent | Schering-Plough Animal Health | – | For anesthesia |
Tyrode’s saline | Reagent | – | – | According as the protocol in Ref. 2. Save at 4°C. |
Timed-pregnant Sprague-Dawley rat | Animal | Charles Rivers Laboratories Japan | – | |
Preparation of culture medium | ||||
Culture glass bottle | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-05 | |
Disposal culture bottle | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-06 | |
Silicon plug with hole | Tool | Ikemoto Rika | 010-032-07 | |
Aluminum foil | Tool | Any company | – | |
Autoclaving bag | Tool | Hogy | HM-26 | For culture bottles |
Autoclaving bag | Tool | Hogy | HM-14A | For silicon plugs |
0.45 μm filter Millex HA | Tool | Millipore | SLHA033SS | |
50 ml conical tube | Tool | Becton Dickinson | 352070 | |
100 ml beaker | Tool | Iwaki | TE-32 | |
Rat IC serum | Reagent | Charles Rivers Laboratories Japan | – | Refer to: Mr. Kunihiko Morisaki, TEL: +81-(0) 45-474-9336; FAX: +81-(0) 45-474-9340 |
D(+)-Glucose | Reagent | Wako | 041-00595 | |
Antibiotic-antimyotic liquid | Reagent | Gibco | 15240 | |
Dissection of embryos | ||||
Ophthalmic straight scissors | Tool | Napox | MB50-7 | For cutting the uterine wall |
Ophthalmic curved scissors | Tool | Napox | MB54-2 | For cutting the yolk sac |
Forceps #5 | Tool | Vigor | T6715 | |
Forceps #5F | Tool | Regine | T6819 | |
Glass pipette | Tool | – | – | Made by hand using Pasteur pipette. |
Autoclaving bag | Tool | Hogy | HM-4 | For glass pipettes |
Binocular microscope | Tool | Leica | Mz7s | |
Light | Tool | Leica | CLS 150XD | |
Oil stone | Tool | Uchida Yoko | 833-2000 | For sharpening of forceps |
Machine oil | Tool | Uchida Yoko | 835-0000 | For sharpening of forceps |