Подготовка сухожилия крысиного хвоста для Биомеханические и Mechanobiological исследований
Summary
Данная статья описывает экспериментальные процедуры, используемые для подготовки сухожилия крысиного хвоста для биомеханических и mechanobiological исследований. Некоторые особенности основных этапов подготовки продемонстрированы, начиная с добычи, площадь поперечного сечения измерения, промывка и загрузка в биореакторе камеры.
Abstract
Крыса хвостом сухожилий (RTTs) являются общие биологические модели, используемые в экспериментальной лабораторные исследования в области физиологии и сухожилия тендопатия. Работа с тех тканей является сложной задачей, потому что они очень хрупкие, и до сих пор не было строго подробный протокол для их изоляции.
Столкнувшись с этими проблемами, мы разработали методы и инструменты для облегчения манипулирования RTTs и контроля жизнеспособности тканей, бесплодие и целостности. Данная статья описывает экспериментальные процедуры, используемые для подготовки RTTs для биомеханических и mechanobiological исследований. Наша работа состоит из четырех основных этапов: добыча, площадь поперечного сечения измерения, промывка и загрузка в биореакторе камеры.
На каждом шагу, все процедуры, материалов и манипуляции подробно излагаются так, чтобы они легко могут быть воспроизведены. Более того, конкретные документы, разработанные представлены: манипуляции пластины используются для разделения RTTs, оптический микрометр в положение ткани при поперечном сечении измерения площади и крепления системы приложить RTTs на биореактора.
Наконец, мы описываем результаты, полученные после нескольких тестов для проверки наших методов. Жизнеспособность, бесплодие и целостность оценки показывают, что наши процедуры достаточно строгим для манипуляций хрупких тканей, таких как сухожилия крысиного хвоста.
Protocol
Discussion
Применяя эти экспериментальные процедуры, мы сможем провести самые разнообразные лабораторные исследования на этот вид ткани. Как, например, исследование тканей дегенерация была проведена применение при стимуляции, чтобы RTTs в течение десяти дней. Каждый день мы оценили ткани мех…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта статья была поддержана NSERC Грант № 299280, IRSST как стипендию для родителей и Г. FRSQ как бакалавриат аспирант М. Сир. Мы благодарим Йоан Лемье-Laneville для выполнения манипуляций, записанных на видео.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | Reagent | Wisent inc. | 311-410-CL | Saline solution |
| Glucose | Reagent | Wisent inc. | 609-037-EL | Saline solution
1g/L |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Saline solution
1% |
| DMEM | Reagent | Invitrogen Corp. | 12800-017 | Culture solution |
| Sodium Bicarbonate | Reagent | Wisent inc. | 600-105-CG | Culture solution 3.7g/L |
| FBS | Reagent | Wisent inc. | 090150 | Culture solution 10% |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Culture solution 1% |
| Optic Micrometer | Tool | Custom-made | ||
| Manipulation plate | Tool | Custom-made | ||
| Bioreactor chamber | Tool | Custom-made |
References
- Bennett, M. B., Ker, R., Dimery, N., Alexander, R. Mechanical properties of various mammalian tendons. J. Zool. Lond. A209, 537-548 (1986).
- Dupuis, D. . Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mécaniques et histologiques [dissertation]. , 114-114 (1981).
- Haut, R. C. Age-dependent influence of strain rate on the tensile failure of rat tail tendon. Journal of Biomechanical Engineering. 105, 296-299 (1983).
- Huppé, N., Lessard, J. -. L., Langelier, E. A Bioreactor Design for the Mechanobiological Study of Soft Tissue Damage and Repair in Conditions that Provide the Best Approximation of Actual Use. , (1985).
- Langelier, E., Dupuis, D., Guillot, M., Goulet, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Rancourt, D. Cross-sectional profiles and volume reconstructions of soft tissues using laser beam measurements. J Biomech Eng. 126, 796-802 (2004).
- Lee, T. Q., Woo, S. L. -. Y. A new method for determining cross-sectional shape and area of soft tissues. J Biomech Eng. 110, 110-114 (1988).
- Parent, G., Cyr, M., Cousineau-Pelletier, P., Desbiens-Blais, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Langelier, E. Current Techniques for the Evaluation of Cross-Sectional Area in Rat Tail Tendons Generate Significant Errors. , (1985).
