Kollajen, Modüller kullanarak Micro-dokuların Fabrikasyon İçeren Hücreleri Jel
Summary
Gömülü hücreler ve yüzey içeren modüller olarak adlandırılan silindirik kollajen jeller, mikro-dokuların oluşturulması endotel hücreleri ile kaplanmıştır.
Abstract
Bu protokol, modüller olarak adlandırılan mikro-dokuların bir tür fabrikasyon açıklamaktadır. Modülü yaklaşım, üniforma, ölçeklenebilir ve vaskülarize doku üretir. Modülleri kollajen yanı sıra diğer gelable veya çapraz bağlanabilir malzemeler yapılabilir. Onlar imalat üzerine çapı yaklaşık 2 mm uzunluğunda ve 0.7 mm ama gömülü hücreleri veya modülleri endotel hücreleri ile kaplıdır boyutu küçültmek. Modüllerin ayrı ayrı gömülü hücreler oksijen ve diğer besinleri difüzyon sınırı içinde ama modülleri perfusable olan büyük dokular oluşturmak için birlikte paketlenmiş olabilir bu kadar küçük. Bu dokular, farklı hücre türleri, karmaşık dokuları oluşturmak için birlikte paketlenmiştir önce gömülü veya modülleri kaplı olabilir çünkü inşaat modüler. Modülleri yapmak için üç temel adım vardır: (1) kollajen nötralize ve bu hücreleri gömerek, tüp içinde (2) jelleşme kolajen ve endotel hücreleri ile modülleri ve (3) kaplama modülleri kesme.
Protocol
Discussion
Biz farklı hücre tipleri 1-11 gömülü modüllerini kullanarak birçok farklı mikro-dokulara fabrikasyon var. Biz başarıyla birincil kardiyomiyositlerde, adacıklar, yağ kök hücreler ve mezenkimal stromal hücrelerinin yanı sıra HepG2, NIH 3T3 ve klon 9 karaciğer hücreleri de dahil olmak üzere çok sayıda hücre hatları gömülü. Biz, sıçan aort endotel hücreleri, insan umbilikal ven endotel hücreleri ve insan mikrovasküler endotel hücreleri de dahil olmak üzere endotel hücreleri çe?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Intramedic tubing PE60 | Becton Dickson | 427416 | Different diameter of tubing can be used to change the diameter of the modules | |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | Gibco | 20012-027 | ||
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25200-072 | ||
| Purcol acidificed collagen, 3 mg/mL | Cedarlane | 5005-B | ||
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
| 20G needle | Becton Dickson | 305175 | Diameter of the needle needs to be similar to the diameter of the tubing | |
| 3 mL syringe | BD Biosciences | 309585 | ||
| 15 mL tube | BD Biosciences | 352096 | ||
| 50 mL tube | BD Biosciences | 352070 | ||
| Convertors Self-Seal Pouch 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | ||
| 10 ml Wide Tip serological pipet | BD Falcon | 357504 | ||
| 10 ml serological pipet | BD Falcon | 357551 | ||
| 5 ml serological pipet | BD Falcon | 357543 |
References
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Med. , (2010).
- Gupta, R., Van Rooijen, N., Sefton, M. V. Fate of endothelialized modular constructs implanted in an omental pouch in nude rats. Tissue Eng. Part A 15, 2875-2887 (2009).
- Leung, B. M., Sefton, M. V. A modular tissue engineering construct containing smooth muscle cells and endothelial cells. Ann Biomed Eng. 35, 2039-2049 (2007).
- McGuigan, A. P., Leung, B., Sefton, M. V. Fabrication of cell-containing gel modules to assemble modular tissue-engineered constructs [corrected]. Nat Protoc. 1, 2963-2969 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Vascularized organoid engineered by modular assembly enables blood perfusion. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 11461-11466 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Modular tissue engineering: fabrication of a gelatin-based construct. J Tissue Eng Regen Med. 1, 136-145 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design and fabrication of sub-mm-sized modules containing encapsulated cells for modular tissue engineering. Tissue Eng. 13, 1069-1078 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design criteria for a modular tissue-engineered construct. Tissue Eng. 13, 1079-1089 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. The thrombogenicity of human umbilical vein endothelial cell seeded collagen modules. Biomaterials. 29, 2453-2463 (2008).
- Sosnik, A., Leung, B., McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Collagen/poloxamine hydrogels: cytocompatibility of embedded HepG2 cells and surface-attached endothelial cells. Tissue Eng. 11, 1807-1816 (2005).
