から初代細胞培養ショウジョウバエ原腸胚
Summary
私たちは、から解離初代細胞を調製するための詳細なプロトコルを提供<em> Drosophil</em>胚。その他、分子生化学的および細胞イメージング手法と一緒に、効果的なRNAiの摂動を遂行する能力は、さまざまな質問がで対処できるようになります<em>ショウジョウバエ</em>一次電池。
Abstract
ここでは、 ショウジョウバエの原腸胚からの解離の初代細胞を調製し、培養する方法を説明します。簡単に言えば、大量のは、若くて健康なハエから胚を上演、集め滅菌し、ガラスホモジナイザーを用いて、単一の細胞懸濁液にして物理的に解離されています。培地中の適切な密度で培養プレートまたはチャンバースライドに播種された後、これらの細胞は、さらにそれらの特定の細胞マーカーによって識別することができるいくつかの形態学的に異なる種類の細胞、に分化することができる。さらに、我々は、遺伝子ノックダウンを引き出すために二重鎖（ds）RNAをこれらの細胞を治療するための条件を提示する。 ショウジョウバエ初代細胞の効率的なRNAiは、単純にdsRNAを含有培養培地で細胞を浸すことによって達成される。他の分子、生化学、細胞イメージング解析とともに、効果的なRNAiの摂動を遂行する能力は、特にショウジョウバエ初代細胞、差別化された筋肉や神経細胞に関連するもので答えられるさまざまな質問ができるようになります。
Protocol
Discussion
ショウジョウバエの細胞の初代培養の発達パターンは、一次細胞調製の過程でいくつかの変数が原因の可能性が、大きく異なります。まず第一に、ハエ産卵のために使用される（古い週間以内）と健康（ウイルス性または細菌感染の自由）若いはずです。彼らは無用であり、それらの胚に由来する細胞が分化することができず、わずか1〜2日間、存続するとして、未受精卵または感染?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
JBは、デイモンラニヨンがん研究財団フェローシップDRG – 1716 – 02サポートされていました。 JZは、NIH / NIGMSフェローシップF32 GM082174 – 02によってサポートされていました。 NPは、ハワードヒューズ医学研究所の研究者でもある。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Shields and Sang M3 medium | Sigma | S3652 | ||
| Fetal bovine serum | JRH Biosciences | 12103-500M | ||
| Insulin from bovine pancreas | Sigma | I-6634 | ||
| Large embryo collection cages | Genesee Scientific | 59-101 | ||
| #25 US standard testing sieve | VWR | 57334-454 | ||
| #45 US standard testing sieve | VWR | 57334-462 | ||
| #120 US standard testing sieve | VWR | 57334-474 | ||
| Dounce tissue grinder, Wheaton 7 mL | VWR | 62400-620 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0040 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0100 | ||
| Costar, 384-well plate | VWR | 29444-078 | ||
| Lab-Tek II Chambered coverglass | Fisher Scientific | 171080 |
References
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