انزيم مرتبط Immunospot الفحص (ELISPOT) : القياس الكمي للردود TH - 1 المناعة الخلوية ضد مولدات المضادات الجرثومية
Summary
ويمكن تحقيق الأهداف وتحديد الحصانة على التكيف الميكروبي في أمراض مجهولة بواسطة استخدام مقايسة immunospot انزيم مرتبط.
Abstract
حصانة التكيفية عنصرا هاما في إزالة مسببات الأمراض داخل الخلايا. القدرة على كشف وتحديد هذه الاستجابات في البشر هو أداة مهمة للتشخيص. في مقايسة immunospot انزيم مرتبط (ELISPOT) تكتسب شعبية لقدرته على تحديد الاستجابات المناعية الخلوية ضد المستضدات الجرثومية ، بما في ذلك السكان كبت المناعة مثل المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية ، وزرع ، واستخدام الستيرويد. هذا الاختبار لديه القدرة على قياس استجابات مناعية ضد مستضدات جرثومية محددة ، فضلا عن تمييز ما إذا كانت هذه الاستجابات TH1 TH2 أو في حرف. ولا يقتصر ELISPOT إلى موقع الالتهاب. فمن تنوعا في قدرته على تقييم لالاستجابات المناعية داخل الدم المحيطي ، وكذلك المشاركة الفعالة من المواقع مثل غسيل القصبات ، السائل الشوكي الدماغي ، واستسقاء. الكشف عن الاستجابات المناعية ضد المستضدات واحدة أو متعددة هو ممكن ، فضلا عن الحواتم محددة داخل البروتينات الميكروبية. هذا يسهل فحص الكشف عن الاستجابات المناعية مع مرور الوقت ، فضلا عن التمييز في مستضدات معترف بها من قبل خلايا تي المضيفة. المقايسات ELISPOT اللون المزدوج متاحة للكشف عن التعبير في وقت واحد من اثنين من السيتوكينات. تطبيقات هذه التقنية الحديثة لتشمل تشخيص مرض السل خارج الرئة ، فضلا عن التحقيق في مساهمة مستضدات المعدية للأمراض المناعة الذاتية.
Protocol
Discussion
برزت مقايسة ELISPOT باعتبارها واحدة من أهم والمقايسات المستخدمة على نطاق واسع لرصد الاستجابات المناعية في البشر ومجموعة متنوعة من الأنواع الأخرى. مع مقايسة ELISPOT ، يمكن قياس الترددات الخلايا المناعية على مستوى خلية واحدة دون توسع أو التلاعب السكان الخلية. وقد تم تطبيقها…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
بدعم جزئي من المنحة 1 فاندربيلت CTSA UL1 RR024975 من المركز الوطني لبحوث الموارد والمعاهد الوطنية للصحة. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة R01 HL 83839 ؛ R01 رقم 65744.
Materials
A. Preparation of Media
B. Preparation of Tris Buffer
- Add 800 ml of ddH2O to 1 L beaker.
- Measure 12 grams of Tris and add to the beaker.
- Add 0.12 grams of magnesium chloride hexahydrate (MgCl2:6H2O) into the beaker.
- Stir with magnetic stirring rod on automatic stirring plate.
- Once dissolved, pH the solution to 9.5.
- Add 200 mL of ddH2O to the beaker, bringing it up to 1000mL.
- Filter the solution with a 0.22 μm filter.
C. Materials necessary for ELISPOT analysis:
References
- Dosanjh, D. P., Hinks, T. S., Innes, J. A., Deeks, J. J., Pasvol, G., Hackforth, S., Varia, H., Millington, K. A., Gunatheesan, R., Guyot-Revol, V., Lalvani, A. Improved diagnostic evaluation of suspected tuberculosis. Ann Intern Med. 148, 325-336 (2008).
- Sung, H. K. E. Diagnosis of abdominal tuberculosis by T-cell based assays on peripheral blood and peritoneal fluid mononuclear cells. Journal of Infection. 59, 409-415 (2009).
- Kim, S. -. H. Diagnosis of Central Nervous System Tuberculosis by T-Cell-Based Assays on Peripheral Blood and Cerebrospinal Fluid Mononuclear Cells. Clinical and Vaccine Immunology. , 1356-1362 (2008).
- Drake, W. P., Dhason, M. S., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Vadivelu, S., Hajizadeh, R., Newman, L. S., Kalams, S. A. Cellular recognition of Mycobacterium tuberculosis ESAT-6 and KatG peptides in systemic sarcoidosis. Infect Immun. 75, 527-530 (2007).
- Allen, S. S., Evans, W., Carlisle, J., Hajizadeh, R., Nadaf, M., Shepherd, B. E., Pride, D. T., Johnson, J. E., Drake, W. P. Superoxide dismutase A antigens derived from molecular analysis of sarcoidosis granulomas elicit systemic Th-1 immune responses. Respir Res. 25, 36-36 (2008).
- Mutsvangwa, J., Millington, K. A., Chaka, K., Mavhudzi, T., Cheung, Y. B., Mason, P. R., Butterworth, A. E., Corbett, E. L., Lalvani, A. Identifying recent Mycobacterium tuberculosis transmission in the setting of high HIV and TB burden. Thorax. 65, 315-320 (2010).
- Streeck, H., Frahm, N., Walker, B. D. The role of IFN-gamma Elispot assay in HIV vaccine research. Nat Protoc. 4, 461-469 (2009).
- Chaudhary, N., Staab, J. F., Marr, K. A. Healthy human T-Cell Responses to Aspergillus fumigatus antigens. PLoS One. 5, e9036-e9036 (2010).
- Manigold, T., Mori, A., Graumann, R., Llop, E., Simon, V., Ferr, S. M., Valdivieso, F., Castillo, C., Hjelle, B., Vial, P. Highly differentiated, resting gn-specific memory CD8+ T cells persist years after infection by andes hantavirus. PLoS Pathog. 6, e1000779-e1000779 (2010).
- Ndongala, M. L., Kamya, P., Boulet, S., Peretz, Y., Rouleau, D., Tremblay, C., Leblanc, R., Côté, P., Baril, J. G., Thomas, R., Vézina, S., Boulassel, M. R., Routy, J. P., Sékaly, R. P., Bernard, N. F. Changes in function of HIV-specific T-cell responses with increasing time from infection. Viral Immunol. 2, 159-168 (2010).
