Plates-formes pour la culture cellulaire microfabriqués mécanique dynamique
Summary
Dans ce protocole, nous démontrons la fabrication d'un tableau de messages microactionneur déplacé verticalement sur lequel la technologie est basée, et comment cette technologie de base peut être modifié pour mener à haut débit de culture de cellules mécanique dynamique dans la culture à la fois à deux dimensions et en trois dimensions paradigmes.
Abstract
La capacité de la sonde systématiquement in vitro de la réponse cellulaire à des combinaisons de stimuli mécanobiologique pour l'ingénierie tissulaire, la découverte de médicaments ou d'études fondamentales de biologie cellulaire est limitée par les technologies actuelles bioréacteur, qui ne peut pas appliquer simultanément une variété de stimuli mécaniques pour les cellules cultivées. Afin de répondre à cette question, nous avons développé une série de plates-formes conçues pour microfabriqué écran pour les effets des stimuli mécaniques dans un format à haut débit. Dans ce protocole, nous démontrons la fabrication d'un tableau de messages microactionneur déplacé verticalement sur lequel la technologie est basée, et encore démontrer comment cette technologie de base peut être modifié pour mener à haut débit de culture de cellules mécanique dynamique dans les deux à deux dimensions et trois paradigmes de la culture dimensionnelle.
Protocol
Discussion
Bien que conceptuellement simple, la fabrication de dispositifs ne prennent une certaine habileté expérimentale et pratique. Particulièrement dans le cas de la culture cellulaire 2D, l'alignement des couches multiples dans l'appareil peut être difficile, surtout sur un large éventail de la région. Pratiquement parlant, nous pouvons atteindre un taux de fiabilité de 100% de succès d'alignement utilisant des dispositifs avec 50 um de tolérance dans l'espacement entre les éléments adjacents en co…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous reconnaissons l'appui financier de sciences naturelles et en génie du Canada et les Instituts canadiens de recherche en santé (CHRPJ 323533-06), le programme Bourses d'études supérieures de l'Ontario à la CM, et le Programme des chaires de recherche en micro et nano systèmes d'ingénierie à YS, et dans mécanobiologie devant le TAS.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard 184 PDMS Monomer and Crosslinker Kit | Dow Corning | |||
| SU-8 masters | ||||
| Silanization agent: (tridecafluoro-1, 1, 2, 2-tetrahydrooctyl)-1-trichlorosilane | United Chemical Technologies | |||
| Foam pads | Craft supply stores, 1-2 mm thick | |||
| Overhead inkjet transparencies | Grand & Toy | |||
| Plexiglass plates | ||||
| C-clamp | hardware store | |||
| Micromanipulator system | Siskiyou | |||
| Custom-made vaccum mount | ||||
| Vision system, Navitar 12x zoom | Navitar | |||
| Connecting tubes | VWR International | Clay Adam Intramedic PE190 | ||
| Blunt 18G needles | Smallparts.com / Amazon Inc. | |||
| Eccentric diaphragm micropump | Schwarzer Precision | SP 500 EC-LC4.5V DC | ||
| Solenoid valves | Pneumadyne | S10MM-30-12-3 | ||
| Solenoid manifold | Pneumadyne | MSV10-1 | ||
| Function generator | ||||
| 3-(trimethoxysilyl) propyl methacrylate | Sigma | |||
| Polyethylene glycol diacrylate 3.4 kDa | Laysan Bio | |||
| Polyethylene glycol 8 kDa | Sigma | |||
| Irgacure 2959 | Ciba Specialty Chemicals | |||
| 1-vinyl-2-pyrolidinone | Sigma | |||
| Standard cell culture reagents |
References
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