تشريح Oenocytes من الكبار ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em
Summary
في الحشرات ، وإنتاج مركبات الهيدروكربونية oenocytes جليدية. هذه المركبات تحمي من الجفاف وتسهيل الاتصالات الكيميائية. هنا نظهر تقنية التشريح المستخدمة لعزل oenocytes من الكبار<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> ، وتوضح كيف يمكن استخدام هذا الإعداد لدراسة الجينات المسؤولة عن تجميع النفط والغاز.
Abstract
في<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> ، كما في غيرها من الحشرات ، طبقة شمعية على السطح الخارجي للبشرة ، التي تتألف أساسا من المركبات الهيدروكربونية ، ويوفر الحماية ضد الجفاف والتحديات البيئية الأخرى. العديد من هذه المركبات الهيدروكربونية جليدية (CHC) وظيفة أيضا إشارات semiochemical ، ومثل التوسط الاتصالات pheromonal بين أفراد من نفس النوع ، أو في بعض الحالات بين الأنواع المختلفة ، والتأثير على السلوك وتعتبر خلايا متخصصة يشار إلى oenocytes كموقع أساسي لتخليق CHC. ومع ذلك ، لا يعرف إلا القليل نسبيا بشأن تورط oenocytes في تنظيم السكروز ، والنقل ، ومسارات ترسب المساهمة في الناتج CHC. نظرا للدور الكبير الذي تؤديه في CHCs جوانب عديدة من الحشرات البيولوجيا ، بما في ذلك الاتصال الكيميائية ، ومقاومة الجفاف ، والحصانة ، فمن المهم للحصول على فهم أكبر لتنظيم الجزيئية والجينية للإنتاج CHC داخل هذه الخلايا المتخصصة. وoenocytes الراشدين<em> د. melanogaster</em> تقع ضمن إهاب البطن ، والمحتشدة metamerically في الشريط تشبه عناقيد يشع على طول سطح جليدية داخلية في كل جزء في البطن. في هذه المقالة الفيديو نظهر تقنية التشريح المستخدمة لإعداد oenocytes من الكبار<em> د. melanogaster</em>. على وجه التحديد ، ونحن نقدم مفصلة خطوة بخطوة مظاهرة (1) كيفية إعداد فيليه الكبار<em> ذبابة الفاكهة</em> البطن ، (2) كيفية تحديد وتمييز oenocytes منهم من الأنسجة الأخرى ، و (3) كيفية إزالة الكتل oenocyte سليمة من إهاب البطن. ويرد موجز تجريبية من التوضيح كيف يمكن استخدام هذا الإعداد لدراسة التعبير عن جينات لها دور في تخليق المواد الهيدروكربونية. أظهر تشريح إعداد هذا القانون سيسمح للتحليل مفصل الجزيئية والجينية وظيفة oenocyte في ذبابة الفاكهة الكبار.
Protocol
Discussion
في هذه المقالة الفيديو نقدم بروتوكول تشريح مفصل لإعداد oenocytes من الكبار D. melanogaster بطريقة ملائمة للتحليل الجزيئي. وقد وصفت في النص القائم على حساب مختصر لطريقة تشريح أماكن أخرى 2 ، وثبت في إعداد الناشئة oenocyte لتكون مناسبة لاستخراج كل من الحمض النووي الريبي وال?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نشكر Amsale بيلاي لمساعدتها في تصوير الفيديو من هذه المادة. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل CIHR ، NSERC والمنح لجنة حقوق الطفل لرابطة الدفاع اليهودية.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
References
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Génétique. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
