Dissezione di Oenocytes da adulti Drosophila melanogaster</em
Summary
Negli insetti, la oenocytes produrre composti di idrocarburi cuticolare. Questi composti proteggono essiccazione e facilitare la comunicazione chimica. Qui mostriamo una tecnica di dissezione utilizzati per isolare il oenocytes da adulti<em> Drosophila melanogaster</em>, Ed illustrare come questa preparazione può essere utilizzata per studiare i geni coinvolti nella sintesi di idrocarburi.
Abstract
In<em> Drosophila melanogaster</em>, Come in altri insetti, uno strato di cera sulla superficie esterna della cuticola, composta principalmente da composti di idrocarburi, fornisce una protezione contro l'essiccamento e altre sfide ambientali. Molti di questi composti di idrocarburi cuticolare (CHC) funzionano anche come segnali semiochemical, e come tale feromonali mediare la comunicazione tra i membri della stessa specie, o in alcuni casi tra le diverse specie, e modificare i comportamenti. Cellule specializzate denominate oenocytes sono considerati come il sito primario per la sintesi CHC. Tuttavia, relativamente poco è conosciuto riguardo il coinvolgimento del oenocytes nella regolazione della biosintesi, trasporto e deposizione di percorsi che contribuiscono alla produzione CHC. Considerato il ruolo significativo che CHC giocare in diversi aspetti della biologia degli insetti, compresa la comunicazione chimica, resistenza essiccazione, e l'immunità, è importante per ottenere una maggiore comprensione del regolamento molecolare e genetica della produzione CHC all'interno di queste cellule specializzate. Il oenocytes adulti<em> D. melanogaster</em> Si trovano all'interno del tegumento addominale, e sono disposte in metamerically nastro come grappoli irradia lungo la superficie interna cuticolare di ogni segmento addominale. In questo articolo il video si dimostra una tecnica di dissezione utilizzati per la preparazione di oenocytes da adulti<em> D. melanogaster</em>. In particolare, forniamo un dettagliato passo-passo di dimostrazione (1) come preparare Filetto di un adulto<em> Drosophila</em> Addome, (2) come identificare le oenocytes e discernere loro di altri tessuti, e (3) come rimuovere intatta cluster oenocyte dal tegumento addominale. Una breve illustrazione sperimentale di come questa preparazione può essere utilizzato per esaminare l'espressione di geni coinvolti nella sintesi di idrocarburi è incluso. La preparazione sezionato dimostrato nel presente documento consentirà l'analisi dettagliata molecolare e genetica della funzione oenocyte nel moscerino della frutta adulti.
Protocol
Discussion
In questo articolo vi presentiamo il video di un protocollo dettagliato dissezione per la preparazione della oenocytes da adulto D. melanogaster, in modo idoneo per l'analisi molecolare. Un testo basato su abbreviato conto del metodo di dissezione è stata descritta in altri 2, e la preparazione risultante oenocyte ha dimostrato di essere adatto per l'estrazione di RNA e proteine sia 2. Utilizzando questa preparazione può anche essere possibile sviluppare metodi per la coltu…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vorremmo ringraziare Amsale Assicuratori per la sua assistenza in riprese di questo articolo video. Questo lavoro è stato finanziato dalla CIHR, NSERC e sovvenzioni CRC JDL.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
References
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