大人からOenocytesの解剖キイロショウジョウバエ</em
Summary
昆虫では、oenocytesはクチクラ炭化水素化合物を生成する。これらの化合物は、乾燥を防ぎ、化学物質のコミュニケーションを促進する。ここでは、大人からoenocytesを分離するために使用される解剖の技術を実証<em>キイロショウジョウバエ</em>と、この準備が炭化水素の合成に関与する遺伝子を研究するために利用することができる方法を示しています。
Abstract
の<em>キイロショウジョウバエ</em>、他の昆虫のように、炭化水素化合物を主成分とするクチクラの外表面にワックス状の層は、乾燥および他の環境問題に対する保護を提供します。これらのクチクラ炭化水素のいくつかの（CHC）の化合物はまた、情報物質のシグナルとして機能し、そのようにフェロモンと同じ種のメンバーの間で、または異なる種の間にいくつかのインスタンスでの通信、および影響行動を媒介する。 oenocytesと呼ばれる特殊化した細胞は、CHCの合成のためのプライマリサイトとみなされる。しかし、比較的少ない生合成、輸送、およびCHCの出力に寄与する析出経路の調節におけるoenocytesの関与について知られています。 CHCsは、化学、通信、乾燥耐性、及び免疫を含む昆虫生物学のいくつかの面で果たしていることが重要な役割を考えると、それはこれらの特殊化した細胞内のCHCの生産の分子と遺伝的調節の一層の理解を得ることが重要です。の成人oenocytes<em> D.キイロ</em>腹部外皮内に位置している、とmetamerically各腹部セグメントの内側のクチクラ表面に沿って放射状にリボン状のクラスターに配列されています。このビデオの記事では、大人からoenocytesの調製に用いられる解剖の技術を実証<em> D.キイロ</em>。具体的には、（1）どのようにフィレットが成人を準備するための詳細なステップバイステップのデモンストレーションを提供する<em>ショウジョウバエ</em>腹部、（2）oenocytesを識別し、他の組織からそれらを識別し、（3）どのように腹部の外皮から無傷のoenocyteクラスタを削除する方法。この準備は、炭化水素の合成に関与する遺伝子の発現を調べるために使用できる方法の簡単な実験的な実例が含まれています。ここに示した解剖の準備は大人ショウジョウバエにおけるoenocyte機能の詳細な分子および遺伝学的解析が可能になります。
Protocol
Discussion
このビデオの記事では、成人D.からoenocytesの調製のための詳細な解剖のプロトコルを提示分子解析に適した方法でキイロ 。解剖の方法の省略されたテキストベースのアカウントは別の場所で2記載されている、との結果oenocyte準備はRNAとタンパク質2の両方の抽出のための適切なことが実証されています。この準備を使用して、それはまた、外植oenocytesの培養方法?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、このビデオの記事の撮影で彼女の援助のためにAmsaleやめるに感謝します。この作業はCIHR、NSERCおよびJDLにCRCの補助金によって賄われていた。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sylgard | Dow Corning | |||
| Tungsten Wire | Ted Pella, Inc. | 27-11 | 0.005”/20’ | |
| Forceps | Dumont | 11252-30 | #5 | |
| Shields and Sang M3 Insect Medium | Sigma | S3652 | ||
| RNeasy Micro Kit | Qiagen | 74004 | ||
| qScript cDNA Synthesis Kit | Quanta Biosciences | 95047-100 | ||
| Monoject Hypodermic Needle | Harvard Apparatus | 722289 | 20G1 with aluminum hub |
References
- Wielowiejski, H. Ueber das blutgewebe der insekten. Zeit. Wiss. Zool. 43, 512-536 .
- Krupp, J. J., Kent, C., Billeter, J. C., Azanchi, R., So, A. K., Schonfeld, J. A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D. Social experience modifies pheromone expression and mating behavior in male Drosophila melanogaster. Curr. Biol. 18, 1373-1383 (2008).
- Locke, M. Surface membranes, Golgi complexes, and vacuolar systems. Annu. Rev. Entomol. 48, 1-27 (2003).
- Billeter, J. C., Atallah, J., Krupp, J. J., Millar, J. G., Levine, J. D. Specialized cells tag sexual and species identity in Drosophila melanogaster. Nature. 461, 987-991 (2009).
- Gould, A. P., Elstob, P. R., Brodu, V. Insect oenocytes: a model system for studying cell-fate specification by Hox genes. J. Anat. 199, 25-33 (2001).
- Lawrence, P. A., Johnston, P. Cell lineage of the Drosophila abdomen: the epidermis, oenocytes and ventral muscles. J. Embryol. Exp. Morphol. 72, 197-208 (1982).
- Johnson, M. B., Butterworth, F. M. Maturation and aging of adult fat body and oenocytes in Drosophila as revealed by light microscopic morphometry. J. Morphol. 184, 51-59 (1985).
- Gutierrez, E., Wiggins, D., Fielding, B., Gould, A. P. Specialized hepatocyte-like cells regulate Drosophila lipid metabolism. Nature. 445, 275-280 (2007).
- Marcillac, F., Bousquet, F., Alabouvette, J., Savarit, F., Ferveur, J. F. A mutation with major effects on Drosophila melanogaster sex pheromones. Génétique. 171, 1617-1628 (2005).
- Chertemps, T., Duportets, L., Labeur, C., Ueyama, M., Wicker-Thomas, C. A female-specific desaturase gene responsible for diene hydrocarbon biosynthesis and courtship behaviour in Drosophila melanogaster. Insect Mol. Biol. 15, 465-473 (2006).
- Legendre, A., Miao, X. X., Da Lage, J. L., Wicker-Thomas, C. Evolution of a desaturase involved in female pheromonal cuticular hydrocarbon biosynthesis and courtship behavior in Drosophila. Insect. Biochem. Mol. Biol. 38, 244-255 (2008).
- Shirangi, T. R., Dufour, H. D., Williams, T. M., Carroll, S. B. Rapid evolution of sex pheromone-producing enzyme expression in Drosophila. PLoS Biol. 7, e1000168-e1000168 (2009).
