항원 특정 VIVO에서 죽이는 분석
Summary
대부분의 감염은 강력한 CTL 반응을 이끌어내는,하지만 가끔 응답 세포의 수량은 병원균 제어 상관 관계를하지 않습니다<sup> 1</sup>. CTL 품질 측정 중 하나는 특별히 죽이는 능력이있다<sup> 2</sup>. 대상 세포의 CFSE 라벨이 CTL 응답 품질을 조사하는 데 사용할 수 있습니다<em> 생체내에</em<sup> 3,4</sup>.
Abstract
Carboxyfluorescein 디아 세 테이트 succinimidyl 에스테르 (CFSE)를 쉽고 빠르게 생체내 수사에 대한 관심의 세포 인구를 분류하는 데 사용할 수 있습니다. 이 라벨은 고전적인 증식 및 마이 그 레이션을 공부하기 위해 사용되었습니다. 여기서 제시하는 방법, 우리는 에피토프 특정 CFSE 표시 대상 세포 4-6의 생존과 살인 볼 입양 전송 후 일정을 단축했습니다. 그들의 수량이 오해 할 수 있으므로 CD8 + T 세포 클론의 특정 살인의 수준은 응답의 품질을 나타낼 수 있습니다. CD8 + T 특정 세포가 시토킨 생산 및 살인 7,8의 감소와 함께 시간이 지남에 따라 기능 소진 될 수 있습니다. 또한, 특정 CD8 + T 세포 클론은 TCR의 specificities 9 각기 다른뿐만 아니라 다른 사람으로 죽일 수 없습니다. 효과적인 세포 매개 내성 (CMI)의 경우, 항원은 T 세포 응답의 충분한 숫자뿐만 아니라 생산 파악뿐만 아니라, 강력한 기능 responding T 세포를해야합니다. 여기 BALB / C 마우스의 두 펩타이드 구체적인 T 세포 클론의 비율 세포 구체적인 살인을 평가합니다.
Protocol
Discussion
CFSE가 자손 10,11 가운데 상대적으로 균등하게 분할하기 때문에 분석은 clonal 확장을 포함한 세포의 proliferative 용량을 조사하기 위해 수정할 수 있습니다. 이 예제 tetramers 또한 CFSE 라벨과 함께있을 수 있습니다 bioluminescence 13, 귀하의 가정에 따라 더 적절한 수 방법을 추적 기타 조직이있다하지만, 휴대 마이 그 레이션 6,12를 조사하기 위해 CFSE 라벨을 사용하는 것도 가능합?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
나는 면역 assays 및 마우스 처리 나를 소개하는 비앙카 Mothé, 칼라 Oseroff 및 마리 – 프랑스 DelGuercio 감사하고 싶습니다. GA 분배기의 연구실에서 작업이 NIH 그랜트 1 RO1 – AI – 073558, GLRCE 부여 1 – U54 – AI – 057153 및 바드 미국 3829-06에 의해 후원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 mm glass beads | Biospec Products | 11079110 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 96-well plate | Costar | 3799 | ||
| Adjulite Incomplete Freund’s Adjuvant | Pacific Immunology | n/a | ||
| DMSO | Sigma | D-5879 | ||
| FBS | GIBCO | 16000-077 | ||
| FC 500 Flow Cytometer | Beckman Coulter | n/a | ||
| Kontes glass tissue grinder | Kontes | 885300-0015 | ||
| Mini Beadbeater | Biospec Products | n/a | ||
| Needle | B-D | 305175 | ||
| Parafilm “M” | Pechiney Plastic Packaging | PM992 | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 157-8 | ||
| PBS | GIBCO | 10010-023 | ||
| PharmLyse lysing reagent | BD Biosciences | 555899 | ||
| RPMI 1640 | GIBCO | 11875-093 | ||
| Syringe | B-D | 309602 | ||
| Vybrant CFSE Kit | Invitrogen (Molecular Probes) | V12883 |
References
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