Agar-Block Microcosmi per decomposizione controllata tessuti vegetali da Funghi aerobica
Summary
Questo video dimostra un approccio controllato ambiente per studiare la degradazione dei tessuti vegetali lignocellulosici da funghi aerobico. La capacità di controllare le fonti di nutrienti e l'umidità è un vantaggio chiave di agar-block microcosmi, ma l'approccio produce spesso alterne fortune. Ci rivolgiamo insidie critici cedere riproducibile, a bassa variabilità dei risultati.
Abstract
I due metodi principali per lo studio biodegradazione fungine dei tessuti vegetali lignocellulosiche sono stati sviluppati per i test del legno (suolo-block; agar-block). E 'ben accettato che il suolo-block microcosmi rendimenti più elevati tassi di decadimento, meno problemi di umidità, bassa variabilità tra gli studi, e soglie più elevate di tossicità conservante. Suolo-block test è quindi la tecnica più utilizzata ed è stato standardizzato dalla American Society for Testing and Materials (ASTM) (metodo D 1413-07). Il terreno blocco design è inconvenienti, però, utilizzando fonti suolo localmente variabile e nel limitare il controllo delle sostanze nutritive esterna (esogena) ai tessuti in decomposizione. Questi svantaggi sono emersi come un problema per l'applicazione di questo metodo per gli altri, ha come obiettivo la ricerca sempre più popolare. Questi obiettivi includono moderni legnocellulosa degradante per la ricerca per la bioenergia, il collaudo biorisanamento di co-metabolizzata sostanze tossiche, valutando i meccanismi ossidativi e il monitoraggio elementi traslocato lungo le reti ifale. Suolo blocchi non prestano abbastanza controllo in queste applicazioni. Un raffinato agar-block approccio è necessario.
Qui usiamo il marciume bruno legno degradanti fungo lacrymans Serpula a degradare legno in agar-blocco microcosmi, con profondo Petri con basso contenuto di calcio agar. Testiamo il ruolo di esogeni gesso su decadimento in una serie temporale, per dimostrare l'utilità e la variabilità attesa. Isolati da una singola scheda rip (taglio longitudinale) sono condizionati, pesato, in autoclave, e introdotto in modo asettico in cima a una rete di plastica. Vaccinazioni fungine sono in ogni faccia del blocco, con esogena gesso aggiunti alle interfacce. Raccolti sono asettiche fino al raccolto finale distruttivo. Questi microcosmi sono progettati per evitare il contatto blocco con agar o pareti piastra di Petri. Condensa è ridotto al minimo durante piatto versa e durante l'incubazione. Infine, l'inoculo / gesso / legno spazio è ridotto al minimo, ma senza permettere contatto. Questi aspetti meno tecnici di agar-block design sono anche le cause più comuni di fallimento e la principale fonte di variabilità tra gli studi. Pubblicazione del video è quindi utile in questo caso, e dimostriamo a bassa variabilità, risultati di alta qualità.
Protocol
Discussion
Utilizzando il nostro agar-block set-up (Figura 1) lacrymans Serpula cresciuto a diretto contatto con le superfici in gesso e in blocchi di legno (Figura 2), portando a oltre il 60% di perdita di peso nel marrone-decomporsi controllo blocchi di pino (Figura 3 ). Questo soddisfa facilmente l'obiettivo standard ASTM di decadimento> 50% e il coefficiente medio di variazione (C V) nel decadimento in era 0,055 alla settimana 16. Questi dati vengono pubblicati in Schilling 7. Ancora una v…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Petri dishes | Nunc | 4014 | 25 x 150 mm | |
| Agar, Type A | Sigma | A4550 | ||
| Ammonium nitrate, NH4NO3 | Millinckrodt | 3436-12 | ||
| Potassium phosphate, KH2PO4 | J.T. Baker | 3246-01 | ||
| Magnesium sulfate 7-hydrate, MgSO4•7H2O | Sigma | 230391 | ||
| D-(+)-Glucose | Sigma | G8270 | Dextrose | |
| Boric acid, H3BO4 | Mallinckrodt | 2549-04 | ||
| Zinc sulfate 7-hydrate, ZnSO4•7H2O | Mallinckrodt | 8880-12 | ||
| Manganous chloride 4-hydrate, MnCl2•4H2O | J.T. Baker | 2540-04 | ||
| Copper(II) sulfate 5-hydrate, CuSO4•5H2O | Sigma | 209198 | ||
| Ammonium heptamolybdate 4-hydrate, (NH4)6Mo7O24•4H2O | Sigma-Aldrich | 431346 | ||
| Calcium chloride dihydrate, CaCl2•2H2O | Mallinckrodt | 4160-12 | ||
| Sodium chloride, NaCl | Mallinckrodt | 7581-12 | ||
| Ferrous sulfate 7-hydrate, FeSO4•7H2O | Mallinckrodt | 5056-12 | ||
| Pipet-aid | Drummond | 4-000-110 | Cordless EtOH the surface |
|
| 10 ml sterile polystyrene pipette | BD Biosciences | 357551 | ||
| Gutter Guard | Thermwell Products Co. | VX620 | Pre-scrubbed with soap Hardware store |
|
| Calcium sulfate hemihydrate, CaSO4•0.5H2O | Acros Organics | 385355000 | ||
| #4 cork borer | Boekel | 1601 | ||
| Parafilm “M” | Pechiney | PM-996 |
References
- ASTM D1413-07. Standard test method for testing wood preservatives by laboratory soil-block cultures. . Annual Book of ASTM Standards. , 185-192 (2007).
- Bravery, A. F. . A miniaturized wood block for the rapid evaluation of wood preservative fungicides. , (1978).
- Low, G. A., Young, M. E., Martin, P., Palfreyman, J. W. Assessing the relationship between the dry rot fungus Serpula lacrymans and selected forms of masonry. Int. Biodeterior. Biodegrad. 46, 141-150 (2000).
- Nicolas, D. Volume I (One/1) – Degradation and Protection of Wood (Syracuse Wood Science Series #5). Wood Deterioration and Its Prevention by Preservative Treatments. , (1973).
- Schilling, J. S. Effects of calcium-based materials and iron impurities on wood degradation by the brown rot fungus Serpula lacrymans. Holzforschung. 64, 93-99 (2010).
