إنتاج استخراج الجنين الفرخ لزراعة الخلايا الجذعية العصبية الفئران كريست
Summary
لزراعة الخلايا الجذعية العصبية قمة (NCSC) في المختبر ، مطلوب المتوسطة الخاصة (NCSCM). جزء أساسي من NCSCM الفرخ هو استخراج الجنين (CEE). نحن هنا وصف دقيق تقنيات لإنتاج كمية من أوروبا الوسطى والشرقية إلى أقصى حد نوعية نقية وعالية ، بما في ذلك تفاصيل مثل العزلة ، والنقع ، الطرد المركزي ، وعمليات الترشيح.
Abstract
قمة العصبية تنشأ من الأديم الظاهر العصبي خلال مرحلة التطور الجنيني ، واستمرت لفترة مؤقتة فقط. التجارب المبكرة تثبيتهم بالفعل الخلايا الاصلية المحفزة لتكون جزءا لا يتجزأ من العرف العصبي 1. Phenotypically ، وتعرف الخلايا الجذعية العصبية قمة (NCSC) في وقت واحد معربا عن P75 (منخفضة أفيني مستقبلات عامل نمو الأعصاب ، LNGFR) وSOX10 خلال هجرتهم من قمة العصبية 2،3،4،5. يمكن لهذه الخلايا الاصلية تفرق في خلايا العضلات الملساء والخلايا أليفة الكروم ، الخلايا العصبية والخلايا الدبقية ، وكذلك الخلايا الصباغية والغضاريف والعظام 6،7،8،9. لزراعة NCSC في المختبر ، وخاصة قمة العصبية الجذعية المتوسطة الخلية (NCSCM) مطلوب 10. الجزء الأكثر تعقيدا في NCSCM هو إعداد استخراج الجنين الفرخ (CEE) الذي يمثل مصدرا أساسيا من عوامل النمو لNCSC فضلا عن أنواع أخرى من explants العصبية. المكونات الأخرى بجانب NCSCM CEE متاحة تجاريا. CCE المنتجة باستخدام معدات المختبر القياسية فإنه من الأهمية العالية لمعرفة التفاصيل الصعبة مثل العزلة ، والنقع ، الطرد المركزي ، وعمليات الترشيح. في هذا البروتوكول وصفنا تقنيات دقيقة لإنتاج كمية من أوروبا الوسطى والشرقية إلى أقصى حد نوعية نقية وعالية.
Protocol
Discussion
ويستند هذا البروتوكول على إدخال تعديلات على الإجراءات التي تم وصفها في الماضي 10،11. بالإضافة إلى المنشورات السابقة التي نعرضها هنا هي الخطوات الفردية المختلفة لعملية التوسع أكثر من ذلك. هذا يدعم مجرب مع تفاصيل مهمة ضمان اجراءات صحيحة ونتائج موثوق بها. كذلك ، عم?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
كان الدعم والمشورة من Pajtler ماركوس وروبرت Bohrer لا تقدر بثمن لتصور من هذا البروتوكول.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
| Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
| DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
| Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
| Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
| Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
| Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
| Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |
References
- Bronner-Fraser, M., Fraser, S. E. Cell lineage analysis reveals multipotency of some avian neural crest cells. Nature. 335, 161-164 (1988).
- Stemple, D. L., Anderson, D. J. Isolation of a stem cell for neurons and glia from the mammalian neural crest. Cell. 71, 973-985 (1992).
- Rao, M. S., Anderson, D. J. Immortalization and controlled in vitro differentiation of murine multipotent neural crest stem cells. J Neurobiol. 32, 722-746 (1997).
- Paratore, C., Goerich, D. E., Suter, U., Wegner, M., Sommer, L. Survival and glial fate acquisition of neural crest cells are regulated by an interplay between the transcription factor Sox10 and extrinsic combinatorial signaling. Cell. 128, 3949-3961 (2001).
- Kim, J., Lo, L., Dormand, E., Anderson, D. J. SOX10 maintains multipotency and inhibits neuronal differentiation of neural crest stem cells. Neuron. 38, 17-31 (2003).
- Anderson, D. J., Groves, A., Lo, L., Ma, Q., Rao, M., Shah, N. M., Sommer, L. Cell lineage determination and the control of neuronal identity in the neural crest. Review Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 62, 493-504 (1997).
- Dorsky, R. I., Moon, R. T., Raible, D. W. Environmental signals and cell fate specification in premigratory neural crest. Review Bioessays. 22, 708-716 (2000).
- Sieber-Blum, M. Factors controlling lineage specification in the neural crest. Int Rev Cytol. 197, 1-33 (2000).
- Dupin, E., Real, C., Ledouarin, N. The neural crest stem cells: control of neural crest cell fate and plasticity by endothelin-3. Int Rev Cytol. 73, 533-545 (2001).
- Maurer, J., Fuchs, S., Jäger, R., Kurz, B., Sommer, L., Schorle, H. Establishment and controlled differentiation of neural crest stem cell lines using conditional transgenesis. Differentiation. 75, 890-891 (2007).
- Wu, Y. Y., Mujtaba, T., Rao, M. S. Isolation of stem and precursor cells from fetal tissue. Methods Mol Biol. 198, 29-40 (2002).
