マウス神経堤幹細胞の培養のためのニワトリ胚抽出物の製造
Summary
in vitroで神経堤幹細胞（NCSC）を育成するために、特殊な培地（NCSCM）が必要です。 NCSCMの本質的な部分は、ニワトリ胚抽出物（CEE）です。ここでは、分離、浸軟、遠心分離、およびろ過プロセスなどの詳細を含む、純粋で高品質CEEの最大化量を、生成する正確なテクニックを説明します。
Abstract
神経堤は、胚発生中に神経外胚葉から発生し、一時的にしか保持されます。初期の実験は、すでに神経堤1の重要部分であると多能性前駆細胞をへのドア。表現型、神経堤幹細胞（NCSC）を同時に神経堤2,3,4,5から、その移行中にP75（低アフィン神経成長因子受容体、LNGFR）とSOX10の発現によって定義されます。これらの前駆細胞は平滑筋細胞、クロム親和性細胞、神経細胞とグリア細胞だけでなく、メラノサイト、軟骨や骨6,7,8,9に分化することができる。 in vitroで NCSCを育成するために、特別な神経堤幹細胞の培地（NCSCM）が10必要です。 NCSCMの最も複雑な部分は、NCSCのためだけでなく、神経外植片の他の種類の成長因子の本質的なソースを表すニワトリ胚抽出物（CEE）の準備です。 CEEの横にある他のNCSCM成分は市販されている。それは分離、浸軟、遠心分離、およびろ過プロセスなどの挑戦的な詳細を知るために非常に重要であるCCE使用して実験室の標準機器を生産。このプロトコルでは、純粋かつ高品質CEEの最大化の量を生産するために、正確なテクニックを説明します。
Protocol
Discussion
このプロトコルは過去10,11に記載されている手順の変更に基づいています。前者の出版物に加えて、我々はここで、プロセスの個々の異なるステップより多くの拡張を示します。これが正しい手続きで信頼性の高い成果を保証する重要な詳細と実験者をサポートしています。さらに、解剖プロセスとして我々は細部に卵黄の袋から胚を取り出すの手順を記述するCEEの抽出の重要な部分…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
マルクスPajtlerとロバートボーラーのサポートやアドバイスは、このプロトコルの可視化のための非常に貴重でした。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
| Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
| DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
| Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
| Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
| Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
| Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
| Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |
References
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