Produção de Extrato de embrião de galinha para o cultivo de células-tronco neurais murino Crest
Summary
Para cultivar células-tronco da crista neural (NCSC) in vitro, um meio especial (NCSCM) é necessária. Parte essencial da NCSCM é extrair pinto embrião (CEE). Nós aqui descrever as técnicas precisas para produzir uma quantidade maximizada de puro e de alta qualidade CEE, incluindo detalhes como o isolamento, maceração, centrifugação, filtração e processos.
Abstract
A crista neural surge a partir da neuro-ectoderma durante a embriogênese e persiste apenas temporariamente. Os primeiros experimentos já corrigido células progenitoras pluripotentes a ser parte integrante da crista neural 1. Fenotipicamente, as células-tronco da crista neural (NCSC) são definidos por, simultaneamente, expressando p75 (low-affine nervo receptor do fator de crescimento, LNGFR) e SOX10 durante a sua migração da crista neural 2,3,4,5. Estas células progenitoras podem se diferenciar em células musculares lisas, células cromafins, neurônios e células gliais, bem como a cartilagem melanócitos e osso 6,7,8,9. Para cultivar NCSC in vitro, um especial da crista neural meio de células-tronco (NCSCM) é necessária 10. A parte mais complexa do NCSCM é a preparação de extrato de pinto embrião (CEE), que representa uma fonte essencial de fatores de crescimento para o NCSC, bem como para outros tipos de explantes neural. Outros ingredientes NCSCM lado CEE estão disponíveis comercialmente. Produzindo CCE usando equipamentos de laboratório padrão é de grande importância para saber sobre os detalhes desafiador como o isolamento, maceração, centrifugação, filtração e processos. Neste protocolo, descrevemos técnicas precisas para produzir uma quantidade maximizada de puro e de alta qualidade CEE.
Protocol
Discussion
Este protocolo é baseado em modificações de procedimentos que têm sido descritas 10,11 no passado. Além de publicações antigas que aqui mostram os passos individuais diferentes do processo mais expandida. Isto suporta o experimentador com detalhes importantes assegurando corretos procedimentos e resultados confiáveis. Além disso, como o processo de dissecção é uma parte essencial de extração CEE descrevemos o procedimento de tomar os embriões fora do saco vitelino em cada detalhe. Há vários p…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
O apoio e aconselhamento de Markus Pajtler Bohrer e Robert foram inestimáveis para a visualização deste protocolo.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
| Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
| DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
| Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
| Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
| Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
| Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
| Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |
References
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