Bu video protokolü, embriyonik gün 14-fare beyninde ganglion eminences nöral kök hücrelerin izolasyonu ve genişleme için neurosphere testinin uygulama göstermektedir.
Memelilerde, kök hücreleri farklılaşmamış hücreler, hayvanın ömrü boyunca, farklı doku ve organlarda hücre doğuşu ve yenileme korumak için bir kaynak olarak görür. Bu potansiyel yaşlanma sürecini veya yaralanma ve hastalık sürecinde kaybolur hücreleri değiştirebilirsiniz. Nöral kök hücrelerin varlığı (NSC'lerde) ilk roman serum serbest bir kültür sistemi, neurosphere assay (NSA) ile yetişkin memelilerin merkezi sinir sistemi (MSS) Reynolds ve Weiss (1992) tarafından tarif edilmiştir. Bu testte, aynı zamanda, farklı bölgelerinden embriyonik MSS NSC'lerde izole etmek ve genişletmek için uygulanabilir. Bu in vitro genişletilmiş NSC'lerde multipotent ve MSS üç önemli hücre tiplerinin ortaya çıkmasına neden olabilir. NSA gerçekleştirmek için nispeten basit olmakla birlikte, güvenilir ve tutarlı sonuçlar elde etmek için gerekli Burada gösterilen usul dikkat. Bu video pratik NSA 14-fare beyin dokusu oluşturmak ve embriyonik günden itibaren NSC'lerde genişletmek gösterir ve teknik detaylar bir tekrarlanabilir neurosphere kültürleri elde edebilirsiniz sağlar. Bu prosedür, tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için MGK orta hasat doku ganglion eminences, disosiyasyon hasat, beyin mikrodiseksiyon E14 fare embriyoları, hasat ve son olarak NSA kültür hücreleri kaplama içerir. Kültür 5-7 gün sonra, ortaya çıkan birincil neurospheres daha sonraki deneyler için NSC'lerde sayısını artırmak için geçişli.
Neurosphere tahlil sadeliği ve tekrarlanabilirlik nedeniyle nöral kök hücreler 1-5 izolasyonu ve genişleme için tercih edilen bir yöntemdir. Bu testte hem de in vitro ve in vivo çalışmalar için kullanılan olabilir farklılaşmamış MSS öncü hücreler, büyük ölçekli üretimi için paha biçilmez bir araçtır. Neurospheres iyi niyetli nöral kök hücreler ve daha sınırlı atalarıdır hem olabileceği vurgulanmalıdır. Bu nedenle, neurosphere oluşturan frekans hesaplan…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Overstreet Vakfı parasal destek verdi.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
NeuroCult NSC Basal Medium | Medium | Stem Cell Technologies | 05700 | |
NeuroCult NSC Proliferation Supplements | Medium supplement | Stem Cell Technologies | 05701 | |
%0.05 trypsin-EDTA | Reagent | Gibco | 25300-062 | |
Soybean trypsin inhibitor | Reagent | Sigma | T6522 | |
Pen/Strep | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
*MEM | Reagent | Gibco | 41500-018 | HEM component |
*HEPES | Reagent | Sigma | H4034 | HEM component |
*Distilled water | Reagent | Gibco | 15230-147 | |
Cell strainer | Sieve | BD Falcon | 352340 | |
T25 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 136196 | |
T80 flask | Culture ware | Nalge Nunc international | 178905 | |
15 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352096 | |
50 ml tubes | Culture ware | BD Falcon | 352070 | |
Fine curved forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11251‐35 | |
Small fine forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11272‐30 | |
Small forceps | Surgical tools | Fine Science Tools | 11050‐10 | |
Fine scissors | Surgical tools | World Percision Instruments, Inc. | 500216 | |
EGF | Growth factor | R&D | 2028-EG | |
b-FGF | Growth factor | R&D | 3139-FB | |
Heparin | Growth factor | Sigma | H4784 | Reconstituted in PBS |
*To make HEM, mix 1×10L packet of MEM and160ml of 1M HEPES and bring the volume to 8.75 L using distilled water. Set the final PH to 7.4 and store it at 4°C.