माउस लार ग्रंथि स्टेम सेल के अलगाव
Summary
माउस लार ग्रंथि से स्टेम कोशिकाओं के अलगाव के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल में वर्णित है. विधि enzymatic और यांत्रिक पाचन रोजगार, और स्टेम कोशिकाओं की विशेषताओं के साथ कोशिकाओं से युक्त salispheres के अलगाव परमिट.
Abstract
दोनों मानव और माउस मूल के परिपक्व लार की गिल्टी पांच प्रकार की कोशिकाओं, जिनमें से प्रत्येक मौखिक गुहा में उत्पादन और लार के उत्सर्जन की सुविधा की एक न्यूनतम शामिल हैं. तरल और श्लेष्म कोष्ठकी कोशिकाओं को प्रोटीन और ग्रंथि के श्लेष्म उत्पादन कारखानों क्रमशः रहे हैं, और लार के उत्पादन के मूल का प्रतिनिधित्व करते हैं. एक बार संश्लेषित लार के विभिन्न enzymatic और अन्य proteinaceous घटकों ductal उपकला प्रकार आकारिकी असर कोशिकाओं की एक श्रृंखला के माध्यम से secreted हैं मुंह के गुहा में एक प्रमुख वाहिनी के माध्यम से लार की अंतिम निष्कासन तक. लार की रचना भी इस प्रक्रिया के दौरान ductal कोशिकाओं द्वारा संशोधित किया गया है.
1,2 Sjögren सिंड्रोम जैसे रोगों की अभिव्यक्ति में है, और सिर और गर्दन की ग्रंथियों द्वारा, लार के उत्पादन के कैंसर के लिए रेडियोथेरेपी उपचार के रूप में कुछ नैदानिक स्थितियों में नाटकीय रूप से कम है. परिणामस्वरूप xerostomia, शुष्क मुँह के एक व्यक्तिपरक लग रहा है, न केवल रोगी की क्षमता को निगल और बात को प्रभावित करता है, लेकिन भी दंत क्षय के विकास को प्रोत्साहित करती है और पीड़ित के लिए सामाजिक दुर्बल हो सकता है.
उपर्युक्त नैदानिक परिस्थितियों में लार के उत्पादन की बहाली इसलिए एक unmet नैदानिक की जरूरत का प्रतिनिधित्व करता है, और जैसे कई अध्ययनों लार 3-5 ग्रंथियों के पुनर्योजी क्षमता का प्रदर्शन किया है. स्टेम माउस और मानव शरीर 6-8 के भीतर विभिन्न ऊतकों से कोशिकाओं के सेल की तरह आबादी के अलगाव के लिए इसके अलावा, हम पता चला है कि स्टेम कोशिकाओं माउस लार ग्रंथियों से अलग विकिरणित लार लार के उत्पादन में बचाव के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है वर्णित विधि का उपयोग 9,10 ग्रंथियों. इस खोज मानव में xerostomic स्थितियों के उपचार के लिए स्टेम सेल आधारित चिकित्सा के विकास के लिए मार्ग प्रशस्त, और भी multipotent स्वयं renewing क्षमताओं के साथ कोशिकाओं से युक्त microenvironment के रूप में लार ग्रंथि के अन्वेषण के लिए.
Protocol
Discussion
टिशू कल्चर विधि यहाँ वर्णित स्टेम सेल युक्त चूहों की लार ग्रंथियों से salispheres के अलगाव के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल का प्रतिनिधित्व करता है. इस तरीके से अलग कक्षों का उपयोग अध्ययन लार ग्रंथि में स्टेम 9 कोशिकाओं के पुनर्योजी क्षमता पर प्रकाश डाला है. सी किट + salispheres से निकाली गई कोशिकाओं के एक सौ के ट्रांसप्लांटेशन विकिरणित माउस लार ग्रंथियों के कार्यात्मक वसूली प्रेरित किया. इन आंकड़ों रोमांचक रहे हैं और xerostomia के लिए स्टेम सेल आधारित चिकित्सा की जांच के लिए एक प्रारंभिक बिंदु प्रदान करते हैं. कई रास्ते लेकिन पता लगाया पूरी स्टेम सेल मार्कर प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रोफ़ाइल, अवअधोहनुज ग्रंथियों की क्षमता विकिरणित कर्णमूलीय लार की गिल्टी और इसके विपरीत के समारोह बचाव, और vivo में स्टेम सेल के आला में ख्यात के लक्षण वर्णन सहित रहते हैं कोशिकाओं. अंततः, इस प्रोटोकॉल के मानव ऊतकों के नमूनों और बाद में मानव अलग कक्षों का उपयोग कर रोगियों में xerostomia के उपचार के लिए संभावित अनुवाद वर्णित विधि के सबसे रोमांचक अनुप्रयोग है.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
| Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
| Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
| Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
| N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
| Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
| Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
| 100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
| Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |
References
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