Transformatie van plasmide DNA in E. coli Met behulp van de heat shock-methode

Abstract

Transformatie van plasmide DNA in E. coli met behulp van de heat shock-methode is een basistechniek van de moleculaire biologie. Het bestaat uit het plaatsen van een buitenlandse plasmide of ligatieproduct in bacteriën. Deze video protocol beschrijft de traditionele methode van transformatie met behulp van commercieel verkrijgbare chemisch bevoegde bacteriën van Genlantis. Na een korte incubatie in ijs, is een mengsel van chemisch bevoegde bacteriën en DNA geplaatst bij 42 ° C gedurende 45 seconden (heat shock) en dan weer terug geplaatst in ijs. SOC media is toegevoegd en de getransformeerde cellen worden geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 30 min met agitatie. Worden verzekerd van het isoleren van kolonies onafhankelijk van transformatie-efficiëntie, zijn twee grootheden van de getransformeerde bacteriën verguld. Deze traditionele protocol met succes kan worden gebruikt om de meeste commercieel beschikbare bevoegde bacteriën te transformeren. De turbocells van Genlantis kan ook gebruikt worden in een nieuwe 3-minuten transformatie protocol, beschreven in de handleiding.