Bioluminescentie Imaging voor beoordeling van immuunreacties na implantatie van Engineered hartweefsel (EHT)
Summary
Deze video toont het gebruik van<em> In vivo</em> Bioluminescentie beeldvorming om de immuunrespons studie na implantatie van Engineered hartweefsel (EHT) bij ratten.
Abstract
Verschillende technieken van cardiale tissue engineering zijn gevoerd in de afgelopen decennia ook steigers strategieën door middel van een native of bioartificial scaffold materialen, entrapment van cardiale myocyten in hydrogels, zoals fibrine en collageen en stapelen van myocyte monolagen 1. Deze concepten zijn gericht op herstel van gecompromitteerde cardiale functie (bijvoorbeeld na een myocardinfarct) of als experimentele modellen (zoals voorspellende toxicologie en stof screening of ziekte modellering). Nauwkeurige controle van overleving van de cel na implantatie van technisch hartweefsel (EHT) is nu mogelijk met behulp van in-vivo bioluminescentie imaging (BLI) technieken 2. Hier beschrijven we de generatie van fibrine-gebaseerde EHT van een transgene rat stam met alomtegenwoordige uitdrukking van vuurvlieg luciferase (ROSA / luciferase-LEW Tg, 3). Implantatie wordt uitgevoerd in de grotere omentum van de verschillende stammen tot rat immuunrespons van het recipiënte organisme volgende EHT implantatie te beoordelen. Vergelijking van de resultaten gegenereerd door BLI en de Enzyme Linked Immuno Spot Techniek (ELISPOT) bevestigen de bruikbaarheid van BLI voor de beoordeling van immuunreacties.
Protocol
Discussion
Voor klinische implementatie van EHT technologie voor cardiale reparatie, fundamentele vragen zoals de immunogeniciteit van zowel cellulaire en matrix componenten of transplantaat overleving na implantatie moeten worden beoordeeld in experimentele modellen. In-vivo bioluminescentie beeldvorming vormt een nuttige nieuwe techniek voor het toezicht op overleving van de cel na transplantatie . Wij hebben met succes gegenereerd fibrine-based EHT met luciferase positieve (luc +) hart cellen door aanpassing van een va…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi en Arne Hansen kreeg financiële steun van de Forschungsgemeinschaft (DFG, SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1) Deutsche. Het werk werd ook ondersteund door subsidies van de Europese Unie om Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart en Angioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
