פליטת אור הדמיה עבור הערכת התגובה החיסונית לאחר השתלת רקמת לב הנדסי (EHT)
Summary
וידאו זה מדגים את השימוש<em> In vivo</em> הדמיה פליטת אור ללמוד התגובה החיסונית לאחר השתלת רקמת לב הנדסי (EHT) בחולדות.
Abstract
טכניקות שונות של הנדסת רקמות לב כבר רדף בעשורים האחרונים, כולל אסטרטגיות פיגומים או באמצעות דובר או bioartificial חומרי הפיגום, המלכוד של myocytes לב ב הידרוג כגון הפיברין או קולגן הערמה של monolayers myocyte 1. מושגים אלה מכוונים שיקום תפקוד הלב נפגע (למשל לאחר אוטם שריר הלב) או כמודל ניסויי (טוקסיקולוגיה חזוי למשל וסינון חומר דוגמנות או מחלה). ניטור מדויק של הישרדות התא לאחר השתלת רקמת לב מהונדסים (EHT) הפכה כעת ניתן להשתמש ב-vivo הדמיה פליטת אור (BLI) טכניקות 2. כאן אנו מתארים את הדור של EHT מבוסס הפיברין מהלחץ עכבר מהונדס עם הביטוי הנפוץ של גחלילית בלוציפראז (רוזה / בלוציפראז-Lew Tg: 3). השרשה מתבצעת לתוך omentum גדול יותר של זני עכברים שונים כדי להעריך את התגובה החיסונית של גוף המקבל הבאים ההשתלה EHT. השוואה של תוצאות שנוצר על ידי BLI לבין אנזימים מקושרים טכניקה חיסונית ספוט (ELISPOT) לאשר את השימושיות של BLI להערכת התגובה החיסונית.
Protocol
Discussion
לפני יישום קליני של הטכנולוגיה EHT לתיקון לב, שאלות בסיסיות כגון immunogenicity של שני המרכיבים הסלולר מטריצה או הישרדות השתל לאחר ההשתלה צריך להעריך במודלים ניסיוניים. In-vivo הדמיה פליטת אור מייצג שיטה חדשה שימושי להישרדות התא ניטור לאחר ההשתלה . אנחנו שנוצר בהצלחה מב…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
סוניה Schrepfer, לנארד קונראדי וארנה הנסן זכו למימון של דויטשה Forschungsgemeinschaft (DFG, SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). העבודה נתמכה גם על ידי מענקים של האיחוד האירופי כדי תומאס Eschenhagen (EUGeneHeart ו Angioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
