Imagem bioluminescência para avaliação das respostas imune após o implante do tecido do coração Engineered (EHT)
Summary
Este vídeo demonstra o uso de<em> In vivo</em> Imagem de bioluminescência para estudar as respostas imune após o implante do tecido do coração Engineered (EHT) em ratos.
Abstract
Várias técnicas de engenharia de tecido cardíaco foram perseguidos nas últimas décadas, incluindo estratégias de andaimes utilizando materiais nativa ou bioartificial andaime, aprisionamento de miócitos cardíacos em hidrogéis, tais como fibrina ou colágeno e empilhamento de monocamadas miócitos 1. Esses conceitos visem a restauração de comprometimento da função cardíaca (por exemplo, após infarto do miocárdio) ou como modelos experimentais (por exemplo, toxicologia preditiva e triagem substância ou modelagem de doença). Monitoramento preciso de sobrevivência das células após o implante do tecido do coração engenharia (EHT) tornou-se possível usando in-vivo de imagem de bioluminescência (BLI) técnicas de 2. Aqui, descrevemos a geração de fibrina baseado EHT de uma linhagem de ratos transgênicos com expressão ubíqua de firefly luciferase (ROSA / luciferase-LEW Tg; 3). Implantação é realizada no omento maior de linhagens de ratos diferentes para avaliar a resposta imune do organismo receptor após a implantação EHT. Comparação dos resultados gerados pelo BLI e Enzyme Linked Immuno Technique spot (ELISPOT) confirmam a usabilidade de BLI para a avaliação das respostas imunes.
Protocol
Discussion
Antes da implementação clínica da tecnologia EHT para reparação cardíaca, questões fundamentais, como a imunogenicidade de ambos os componentes celulares e da matriz ou sobrevida do enxerto após o implante devem ser avaliados em modelos experimentais. In-vivo de imagem de bioluminescência representa uma nova técnica útil para a sobrevivência da célula de acompanhamento após o transplante . Nós gerado com sucesso fibrina baseado EHT contendo luciferase positivo (luc +) células do coração pela a…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Sonja Schrepfer, Lenard Conradi e Arne Hansen recebeu financiamento da Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1, CO 858/1-1, HA 3423/3-1). O trabalho também foi suportado por concessões da União Européia para Thomas Eschenhagen (EUGeneHeart e Angioscaff).
Materials
- LEW-Tg(Gt(ROSA)26Sor-luc)11Jmsk rats (NBPR rat number 0299, http://www.anim.med.kyoto-u.ac.jp/NBR/)
- Bovine fibrinogen (stock solution: 200 mg/ml plus aprotinin 5 μg/ml fibrinogen in NaCl 0.9%, Sigma F4753)
- Matrigel (BD Bioscience 356235)
- DMEM (Biochrome F0415)
- Horse serum (Gibco 26050)
- Penicillin/streptomycin (Gibco 15140)
- Insulin (Sigma-Aldrich I9278)
- Aprotinin (Sigma Aldrich A1153)
- d-Luciferin (Biosynth L-8220)
- Enzyme-linked immunosorbent spot (ELISpot) assay plates (Hassa Laborbedarf, S2EM004M99)
References
- Eschenhagen, T., Zimmermann, W. H. Engineering myocardial tissue. Circ Res. 97, 1220-1231 (2005).
- van der Bogt, K. E., Schrepfer, S., Yu, J. Comparison of transplantation of adipose tissue- and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the infarcted heart. Transplantation. 87, 642-652 (2009).
- Hakamata, Y., Murakami, T., Kobayashi, E. “Firefly rats” as an organ/cellular source for long-term in vivo bioluminescent imaging. Transplantation. 81, 1179-1184 (2006).
- Hansen, A., Eder, A. Development of a Drug Screening Platform Based on Engineered Heart Tissue. Circ Res. , (2010).
