Invitrogen NuPage Novex बीआईएस Tris MiniGels का प्रयोग पश्चिमी सोख्ता
Summary
यह तकनीकी लेख एक मानक पश्चिमी सोख्ता Invitrogen से व्यावसायिक रूप से उपलब्ध NuPAGE वैद्युतकणसंचलन मिनी जेल प्रणाली का उपयोग कर प्रक्रिया का वर्णन करता है.
Abstract
पश्चिमी सोख्ता (या immunoblotting) के जांचकर्ताओं को एक प्रोटीन की अभिव्यक्ति को सत्यापित करने के लिए अनुमति देता है एक मानक प्रयोगशाला प्रक्रिया है, विभिन्न नमूनों में मौजूद प्रोटीन के रिश्तेदार राशि निर्धारित करते हैं, और सह immunoprecipitation प्रयोगों के परिणामों का विश्लेषण. इस विधि में, एक लक्ष्य प्रोटीन ऊतक homogenate या निकालने के किसी नमूने में एक विशिष्ट प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ पाया है. प्रोटीन आणविक भार अनुसार जुदाई एसडीएस पृष्ठ denaturing का उपयोग करने के लिए हासिल की है. एक झिल्ली को स्थानांतरण के बाद, लक्ष्य प्रोटीन एक विशिष्ट प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ जांच है और chemiluminescence द्वारा पता लगाया.
अपनी पहली वर्णन के बाद से, पश्चिमी सोख्ता तकनीक पूर्व डाली जैल और उपयोगकर्ता के अनुकूल उपकरण सहित कई सुधार आया है. हमारी प्रयोगशाला में, हम Invitrogen से व्यावसायिक रूप से उपलब्ध NuPAGE वैद्युतकणसंचलन प्रणाली का उपयोग करने के लिए चुना है. यह एक अभिनव तटस्थ पीएच, असंतत एसडीएस PAGE, पूर्व डाली मिनी जेल प्रणाली है. I) 8 महीने से लेकर 1 वर्ष पूर्व डाली जैल की एक लंबी शैल्फ जीवन, ii) 1 से 400 केडीए के लिए आणविक वजन का एक व्यापक रेंज जुदाई प्रकार के आधार: इस प्रणाली सहित पारंपरिक Laemmli तकनीक से अधिक कई फायदे प्रस्तुत की जेल इस्तेमाल किया, और iii) अधिक से अधिक बहुमुखी प्रतिभा (acrylamide प्रतिशत, जेल के प्रकार, और चल रहे बफर के ईओण संरचना की सीमा).
इस वीडियो आलेख में वर्णित प्रक्रिया 4-12% बीआईएस Tris ढाल जैल और एमईएस बफर कैसे एक पश्चिमी धब्बा प्रदर्शन करने के लिए Invitrogen NuPAGE वैद्युतकणसंचलन प्रणाली का उपयोग का एक उदाहरण के रूप में चल रहा है के साथ बीआईएस Tris असंतत बफर प्रणाली का इस्तेमाल करता है. हमारी प्रयोगशाला में, हम विभिन्न जैव रासायनिक इस पश्चिमी सोख्ता पद्धति का उपयोग करके अनुप्रयोगों के लिए अच्छा है और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त किया है.
Protocol
Discussion
यहाँ प्रस्तुत की प्रक्रिया एमईएस PAGE denaturing Invitrogen NuPAGE Novex वैद्युतकणसंचलन प्रणाली का उपयोग कर के एक उदाहरण के रूप में बफर चलाने के साथ एक बीआईएस Tris जेल का उपयोग करता है. इसके अलावा, इस पूर्व डाली जेल प्रणाली के तहत प्रोटी?…
Acknowledgements
References
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