두 광자 영상은 기저 조건에서 림프절 이내에 면역 반응 한 중 림프구 세포 운동성 및 상호 작용을 밝혀있다. 여기, 우리는 T 세포, 림프절의 고립, 그리고 CD4의 영상 운동성 + explanted 림프절의 T 세포의 입양 전송을 보여줍니다.
두 광자 영상은 기저 조건에서 림프절 이내에 면역 반응 1의 개시에 운동성 및 세포 상호 작용의 우아한 안무를 밝혔다. 여기, 우리는 표시된 T 세포, 림프절의 고립, 그리고 CD4의 영상 운동성 + 첫번째 2002 2에서 설명한대로 explanted 림프절의 T 세포의 입양 전송을위한 방법을 제시한다. 면역 세포의 2 광자 영상은 세포가 찬란 셀 추적기 색소와 얼룩이나 형광 단백질을 표현을 통해, 레이블 것을 요구합니다. 우리는받는 동물의 꼬리 정맥 약 15-30 분 이내에 림프 장기들이 집.에 공여 마우스에서 파생된 주입 세포의 입양 전송 절차를 보여주는 우리는 림프 노드의 절연 설명하고 excised 림프 노드의 적절한 장착을 보장하는 방법을 설명합니다. 이러한 perfused 미디어, 온도 및 레이저 파워의 적절한 산소와 같은 다른 고려 사항은 설명합니다. 마지막으로, 우리는 순진한 CD4의 3D 영상 + T 세포 37 정상 상태 운동성을 전시을 제시 ° C.를
이 비디오 프로토콜에서 우리는 입양 세포 전송 및 주변 림프절의 영상 림프구의 운동성에 필요한 림프절 절연 및 준비 절차를 보여줍니다. 두 광자 이미징 모두 explanted 티슈 (여기에 표시) 및 intravital 준비에 공촛점 이미징을 통해 몇 가지 장점이 있습니다. 특히, 빛의 산란을 최소화하고 림프절의 캡슐 아래 영상 ~ 300 micrometers 가능하며 일부 조직 4 깊이 적외선 여진 중 하나를 사용하십시오. 또한, 다중 광자 여기는 표백 사진 및 초점 비행기 측면 밖으로 조직 손상을 최소화, 목적의 초점으로 제한됩니다. 새로운 기술과 마찬가지로, 그러나, 두 광자 영상은 만병 통치약이 아니므로 그 제한과 잠재적인 함정은 마음 5 보관해야합니다. 관심 콜라겐 – 세포와 같은 두 번째 고조파 세대로 본질적인 신호를 제외하면 찬란 외부 프로브 또는 형광 단백질의 표현에 의해 표시되어야합니다 – 이러한 가운데 그 요구 사항입니다. 노출 따라서 이러한 분류 세포가 검은 무효로 수영하는가 생성됩니다, 사실 그들은에 열중하고 있으며, 구조적 요소와 무수한 다른 레이블이 지정되지 않은, 보이지 않는 세포의 복잡한 환경과 상호 작용하는 반면.
면역학에 두 광자 이미징의 도입 이후 6 년 만에,이 기술은 직접 세포 – 세포 상호 작용, 세포 운동성 및 현지화, 세포 신호 전달 경로와 세포 독성 세포를 포함하여 그대로 살아있는 조직 프로세스의 시각화하여 오랜 질문을 해결하기 위해 연구자 수 있습니다 이벤트를 죽이고. 필드는 신속하게 초기 현상 학적 설명을 넘어 진화하고 있으며, 함께 컴퓨터 모델링 및 시뮬레이션과 정량 분석은 지금 림프절 내에 분명히 혼란 세포 움직임과 상호 작용이 효율적인 면역 반응으로 이어질 방법을 이해하기 위해 시작되었습니다. 이 진행은 종합적으로 immunoimaging에 대한 두 광자 현미경의 응용 프로그램을 설명하는 100 종이 넘는리스트 최근 간행물 1에서 검토합니다.
우리는 시약의 준비와 지원 레베카 파켓 감사하고 싶습니다. MPM은 건강과 보조금 GM – 41514 (MDC), NS – 48252 (KGC), 또한 국립 보건원에서 GM – 48071 (IP)의 지원 국립 연구소에서 루스 L. Kirchstein predoctoral 친교에 의해 지원됩니다.