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Immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) est un outil puissant pour identifier les protéines: les interactions chromatine qui se produisent dans le contexte de cellules vivantes 1-3. Cette technique a été largement exploitée dans les cellules de culture de tissus, et dans une moindre mesure, dans les tissus primaires. L'application de ChIP pour les tissus de rongeurs embryonnaire, surtout en période précoce du développement, est compliquée par la quantité limitée de tissu et de l'hétérogénéité des cellules et de tissus dans l'embryon. Nous présentons ici une méthode pour effectuer une puce en utilisant jours dissocié embryonnaire 8.5 (E8.5) embryon. Chromatine cisaillé à partir d'un seul embryon E8.5 peut être divisé en jusqu'à cinq aliquotes, qui permet au matériel de l'enquêteur suffisants pour les contrôles et des enquêtes de protéines spécifiques: les interactions chromatine.
Nous avons utilisé cette technique pour commencer à documenter des protéines: les interactions chromatine lors de la spécification du tissu-spécifique des programmes d'expression génique. L'hétérogénéité des types de cellules dans un embryon limite nécessairement l'application de cette technique car le résultat est la détection de protéines: les interactions chromatine sans distinguer selon que les interactions se produisent dans tous, un sous-ensemble, ou un seul type cellulaire (s). Cependant, l'examen du tissu-spécifique des gènes pendant ou après l'apparition de tissu-spécifique l'expression des gènes est possible pour deux raisons. Tout d'abord, immunoprécipitation de facteurs tissulaires spécifiques des isolats nécessairement chromatine du type cellulaire où le facteur est exprimé. Deuxièmement, immunoprécipitation de coactivateurs et les histones contenant modifications post-traductionnelles qui sont associés à l'activation des gènes ne devraient être disponibles sur les gènes et les séquences régulatrices de gènes dans le type cellulaire où le gène est ou a été activé. La technique devrait être applicable à l'étude de la plupart des tissus spécifiques événements d'activation des gènes.
Dans l'exemple décrit ci-dessous, nous avons utilisé E8.5 et E9.5 embryons de souris pour examiner les facteurs liant à un promoteur du gène spécifique du muscle squelettique. Somites, qui sont les précurseurs de tissus à partir de laquelle les muscles squelettiques du tronc et des branches vont se former, sont présents à E8.5-9.5 4,5. Myogenin est un facteur de régulation nécessaire à la différenciation du muscle squelettique 6-9. Les données démontrent que la myogénine est associée à son propre promoteur de E8.5 E9.5 et d'embryons. Parce que la myogénine est exprimé uniquement dans les somites, à ce stade de développement 6,10, les données indiquent que les interactions avec les myogénine son propre promoteur sont déjà produites dans les cellules précurseurs des muscles squelettiques dans E8.5 embryons.