Glycans التصوير في الأجنة التي وصفها اسماك الزرد الاستقلابية والكيمياء Bioorthogonal انقر
Summary
يوصف أسلوب النقر على الكيمياء التي تسمح لوضع العلامات وسريع موسع ، وقوية من آلكاين الموسومة glycans في الأجنة الزرد. وقد التقط glycans Fucosylated في طبقة التغليف الأجنة الزرد في مرحلة تكون المعيدة في وقت متأخر من هذه الدراسة.
Abstract
وقد تم مؤخرا glycans التصوير في فيفو تمكين باستخدام مراسل الكيميائية bioorthogonal الاستراتيجية عن طريق علاج الخلايا أو الكائنات الحية مع السكريات الأحادية أو أزيد آلكاين الموسومة – 1 ، 2. أدرجت تعديل السكريات الأحادية ، التي تتم معالجتها بواسطة آلات السكروز غليكان ، في glycoconjugates سطح الخلية. وbioorthogonal أزيد أو السماح به آلكاين ثم اقتران التساهمية مع تحقيقات نيون للالتصور ، أو تقارب مع تحقيقات وتحليلات لتخصيب glycoproteomic. يصف هذا البروتوكول الإجراءات التي تستخدم عادة لتصوير موسع من glycans fucosylated في الأجنة الزرد ، ومنها : 1) microinjection أحد خلايا الأجنة المسرح مع الناتج المحلي الإجمالي alkynylfucose – 5 (الناتج المحلي الإجمالي FucAl) ، 2) وضع العلامات glycans fucosylated في طبقة من يغلف الزرد الأجنة ، مترافق مع آزيد fluorophores حيويا عبر النحاس (I) المحفزة آزيد – آلكاين الحلقيه (CuAAC) ، والتصوير 3) بواسطة المجهر مبائر 3. يمكن أن يكون الأسلوب هو موضح هنا مدد بسهولة إلى فئات أخرى من تصور glycans ، glycans مثل التي تحتوي على حمض السياليك 4 و N – acetylgalactosamine 5 ، 6 ، في البلدان النامية والزرد في الكائنات الحية الأخرى.
Protocol
Discussion
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل جزئيا من قبل المعاهد الوطنية للصحة (GM093282 لPW ؛ 3U54AI057158 – 06S1 إلى RDS) وصناديق بدء التشغيل من كلية ألبرت اينشتاين للطب.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalog number |
| Copper(II) sulfate pentahydrate | Sigma-Aldrich | 203165 |
| Alexa Fluor 488 azide | Invitrogen | A10266 |
| dextran, Alexa Fluor 594 | Invitrogen | D-22913 |
| (+)-Sodium L-ascorbate | Sigma-Aldrich | A7631 |
| Bathocuproinedisulfonic acid | Acros Organics | 164060010 |
| Glass bottom microwell dish | MatTek | P35G-1.5-14-C |
References
- Laughlin, S. T., Bertozzi, C. R. Imaging the glycome. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 12-17 (2009).
- Baskin, J. M., Bertozzi, C. R. Bioorthogonal click chemistry: Covalent labeling in living systems. Qsar Comb. Sci. 26, 1211-1219 (2007).
- Soriano del Amo, D. Biocompatible copper(I) catalysts for in vivo imaging of glycans. J. Am. Chem. Soc. 132, 16893-16899 (2010).
- Chang, P. V. Metabolic labeling of sialic acids in living animals with alkynyl sugars. Angew. Chem. Int. Ed. 48, 4030-4033 (2009).
- Laughlin, S. T., Baskin, J. M., Amacher, S. L., Bertozzi, C. R. In vivo imaging of membrane-associated glycans in developing zebrafish. Science. 320, 664-667 (2008).
- Baskin, J. M., Dehnert, K. W., Laughlin, S. T., Amacher, S. L., Bertozzi, C. R. Visualizing enveloping layer glycans during zebrafish early embryogenesis. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 10360-10365 (2010).
- Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation. J. Vis. Exp. , (2009).
- Wang, W. Chemoenzymatic synthesis of GDP-L-fucose and the Lewis X glycan derivatives. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 16096-16101 (2009).
- Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function. J. Vis. Exp. , (2009).
- Westerfield, M. . THE ZEBRAFISH BOOK, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2007).
- Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. Origin and organization of the zebrafish fate map. Development. 108, 581-594 (1990).
