Zebra balığı embriyolar alkin etiketli glukanlardır hızlı, noninvaziv ve sağlam etiketleme için izin veren bir tıkla-kimya temelli yöntem açıklanmıştır. Bu çalışmada geç gastrulasyon aşamasında zebrafish embriyoların saran tabaka Fucosylated glukanlardır görüntülenmiştir.
In vivo Görüntüleme glukanlardır azid veya alkin etiketli Monosakkaritler 1, 2 ya da organizma hücreleri tedavi ederek son zamanlarda bir bioorthogonal kimyasal muhabiri stratejisi kullanılarak etkin olmuştur. Glukanıdır biyosentetik makine tarafından işlenen değiştirilmiş Monosakkaritler, hücre yüzeyinde glycoconjugates içine dahil edilmiştir. Bioorthogonal azid veya alkin etiketleri sonra görünüm için floresan problar ile kovalent konjugasyon, izin veya zenginleştirme ve glycoproteomic analiz afinite probları. Saran tabaka fucosylated glukanlardır etiketleme 1) GSYİH-5-alkynylfucose (GSYİH FucAl), 2 ile tek hücreli aşamada embriyo mikroenjeksiyon): Bu protokol da dahil olmak üzere genellikle zebrafish embriyolar fucosylated glukanlardır noninvaziv görüntüleme için kullanılan prosedürler açıklanmaktadır biyouyumlu konfokal mikroskopi 3 Cu (I) katalize azid-alkin Siklokatılma (CuAAC), ve 3) görüntüleme ile azid-konjuge fluorophores zebrafish embriyolar. Burada açıklanan yöntem glukanlardır diğer sınıflar, örneğin glukanlardır içeren sialik asit 4 ve N-acetylgalactosamine 5, 6, gelişmekte olan Zebra balığı ve diğer canlı organizmaların kolayca görselleştirmek için uzatılabilir.
The authors have nothing to disclose.
Albert Einstein College of Medicine başlangıç fonları; Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (RDS 3U54AI057158-06S1 PW GM093282) tarafından kısmen desteklenmiştir.
Name of the reagent | Company | Catalog number |
Copper(II) sulfate pentahydrate | Sigma-Aldrich | 203165 |
Alexa Fluor 488 azide | Invitrogen | A10266 |
dextran, Alexa Fluor 594 | Invitrogen | D-22913 |
(+)-Sodium L-ascorbate | Sigma-Aldrich | A7631 |
Bathocuproinedisulfonic acid | Acros Organics | 164060010 |
Glass bottom microwell dish | MatTek | P35G-1.5-14-C |