جهاز ميكروفلويديك مع أنماط Groove لدراسة السلوك الخليوي
Summary
وصفنا بروتوكول لتصنيع أجهزة ميكروفلويديك التي تتيح التقاط الخلايا والثقافة. في هذا النهج تستخدم المجهرية منقوشة مثل الأخاديد داخل قنوات ميكروفلويديك لإنشاء مناطق منخفضة إجهاد القص داخل الخلية والتي يمكنها ان ترسو.
Abstract
نحن تصف جهاز ميكروفلويديك مع أنماط السلوك microgrooved لدراسة الخلوية. هذه المنصة ميكروفلويديك يتكون من قناة fluidic العلوي والسفلي ركيزة microgrooved. الى افتعال القنوات microgrooved ، كان أحد كبار محاذاة بولي (dimethylsiloxane) (PDMS) العفن الذي يحتوي على انطباع من القنوات ميكروفلويديك والمستعبدين من ركيزة microgrooved. باستخدام هذا الجهاز ، وكانت الخلايا الليفية يجمد الماوس ومنقوشة داخل ركائز microgrooved (25 ، 50 ، 75 ، وعرضها 100 ميكرون). وكان لدراسة الخلايا في جهاز ميكروفلويديك ، perfused وسائل الإعلام التي تحتوي على بيروكسيد الهيدروجين ، والخامس Annexin ، ويوديد propidium fluidic في القناة لمدة 2 ساعة. وجدنا أن الخلايا المعرضة للالاكسدة أصبحت أفكارك. وتأكدت هذه الخلايا أفكارك قبل الخامس Annexin أن منضمة إلى فسفاتيديل في النشرة الخارجي للغشاء البلازما أثناء عملية موت الخلايا المبرمج. باستخدام هذا الجهاز ميكروفلويديك مع أنماط microgrooved ، لوحظ في عملية موت الخلايا المبرمج في الوقت الحقيقي وتحليلها باستخدام ميكروسكوب مقلوب يحتوي على غرفة الحضانة (37 درجة مئوية ، 5 ٪ CO 2). لذلك ، يمكن لهذا الجهاز ميكروفلويديك تدمج مع ركائز microgrooved تكون مفيدة لدراسة سلوك وأداء الخلوية عالية الإنتاجية فحص المخدرات.
Protocol
Discussion
ويجمد منقوشة داخل الخلايا وركائز microgrooved في جهاز ميكروفلويديك. ولوحظ في عملية موت الخلايا المبرمج للخلايا تعرضت لبيروكسيد الهيدروجين في الوقت الحقيقي وتحليلها باستخدام Annexin الخامس ويوديد propidium. وبالتالي ، يمكن لهذا الجهاز يحتوي على قنوات ميكروفلويديك مرسمة مجهارية تكون مفيدة ?…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Reagent | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) |
| DMEM | medium | Invitrogen | 11965 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Media |
| FBS | serum | Invitrogen | 10082-147 | Fetal Bovine Serum |
| Hydrogen peroxide | Reagent | Sigma Aldrich | H1009 | |
| Apoptosis assay | Invitrogen | V13242 | Annexin A, propidium iodide | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 2015 | ||
| Si wafer | Tool | 4 inch silicone wafer | ||
| Reactive oxygen plasma | Reagent | Harrick Scientific | treat wafer 5 min at 30W | |
| inverted microscope | Tool | Nikon | TE 2000 |
References
- Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform. BMC Biotechnol. 7, (2007).
- Khademhosseini, A., Yeh, J., Eng, G., Karp, J., Kaji, H., Borenstein, J., Farokhzad, O. C., Langer, R. Cell docking inside microwells within reversibly sealed microfluidic channels for fabricating multiphenotype cell arrays. Lab Chip. 5, 1380-1386 (2005).
- Whittemore, E. R., Loo, D. T., Watt, J. A., Cotman, C. W. A detailed analysis of hydrogen peroxide-induced cell death in primary neuronal culture. Neurosciences. 67, 921-932 (1995).
