गैर शल्य चिकित्सा फेफड़े और फेफड़े Draining लिम्फ नोड्स के प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण के साथ चूहे की Intratracheal टपकाना
Summary
हम ट्रेकिआ के माध्यम से anesthetized चूहों के फेफड़ों में गैर सर्जिकल परीक्षण सामग्री के वितरण का वर्णन. इस विधि फेफड़ों बैक्टीरियल और वायरल रोगज़नक़ों, साइटोकिन्स, एंटीबॉडी, मोती, रसायन, या रंजक के लिए जोखिम देता है. हम आगे और कटाई का वर्णन प्रवाह cytometry के लिए और फेफड़ों फेफड़ों draining लिम्फ नोड्स (LDLNs) के प्रसंस्करण.
Abstract
वायुकोशीय मैक्रोफेज और फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं (एलडीसी) के रूप में ऐसे Phagocytic कोशिकाओं को फेफड़ों में वायुकोशीय स्थान से लगातार प्रतिजनों नमूना. एलडीसी, विशेष रूप में, के लिए फेफड़ों draining लिम्फ नोड्स (LDLNs) जहां वे टी कोशिकाओं की शुरुआत एक उपयुक्त immunogens 1,2 की एक किस्म के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए साँस एंटीजन मौजूद हैं. को विस्थापित करने के लिए जाना जाता है चूहों में फेफड़ों और हवाई प्रतिजनों के बीच बातचीत मॉडल करने के लिए, प्रतिजनों 1,3,4 intranasally प्रशासित किया जा सकता है, intratracheally 5 या 6 एयरोसौल्ज़ के रूप में . प्रत्येक मार्ग द्वारा डिलिवरी विशिष्ट तकनीकी कौशल और सीमाओं कि एक प्रयोग डिजाइन करने से पहले विचार किया जाना चाहिए शामिल है. उदाहरण के लिए, intranasal और aerosolized जोखिम दोनों फेफड़ों और ऊपरी श्वास पथ के लिए प्रतिजनों उद्धार. इसलिए प्रतिजनों नाक जुड़े lymphoid ऊतक (NALT) 7 का उपयोग कर सकते हैं, संभावित परिणामों की व्याख्या उलझी. इसके अलावा, निगल, छींकने, और माउस के साँस लेने की दर भी दिया खुराक में विसंगतियों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. हालांकि ऊपरी श्वास नलिका के भागीदारी कुछ अध्ययनों के लिए पसंद किया जा सकता है, यह विशेष रूप से फेफड़ों में शुरू की घटनाओं पर ध्यान केंद्रित प्रयोगों को जटिल बना सकता है. इस सेटिंग में, intratracheal मार्ग (यह) बेहतर है के रूप में यह परीक्षण सामग्री सीधे फेफड़ों में और उद्धार NALT नजरअंदाज. कई लोग इसे इंजेक्शन प्रोटोकॉल मौखिक गुहा या ट्रेकिआ की शल्य चिकित्सा जोखिम फेफड़ों का उपयोग ट्रेकिआ के माध्यम से या तो अंधे इंटुबैषेण शामिल है. इस के साथ साथ, हम यह टपकाना के लिए एक सरल, संगत, गैर सर्जिकल विधि का वर्णन. ट्रेकिआ के उद्घाटन के एक फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र का उपयोग करते हुए कल्पना और एक तुला gavage सुई तो ट्रेकिआ में सीधे डाला innoculum उद्धार. हम भी कटाई और LDLNs और प्रतिजन तस्करी के प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण के लिए फेफड़ों के प्रसंस्करण के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन.
Protocol
Discussion
हम इस प्रोटोकॉल का उपयोग किया है बेसिलस anthracis spores के फेफड़ों से LDLNs तस्करी अध्ययन. इसी तरह के अनुप्रयोगों के लिए, फेफड़ों के लिए दिया कणों की संख्या सावधानी से चुना जाना चाहिए ताकि इंजेक्शन सामग्री प्रव?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 70μm Cell stariner | BD | ||
| Aniline Blue | Fisher | A967-25 | |
| Animal Feeding needle | Popper and Sons Inc | 7920 | |
| Collagenase | Sigma | C2139 | |
| Collagenase TypeIV | Worthington | ||
| Collagenase D | Roche | 11088974103 | |
| DPBS | Invitrogen | 14190 | |
| Fluoresbrite YG Microspheres (0.5μm) | Polysciences, Inc | 17152 | |
| HBSS without Calcium chloride and magnesium chloride | Invitrogen | 14170 | |
| Ketamine HCl (100mg/ml) | Hospira Inc | ||
| Laryngoscope Blade | PennCentury, Inc | For Model LS-1 | Refer to www.penncentury.com |
| Lightweight Fiber Optic Laryngoscope | WelchAllyn | 80814 | |
| Red Fluorescent Beads (0.5μm) | Invitrogen | F8812 | For i.p injection |
| Xylazine (100mg/ml) | Lloyd Laboratories |
References
- Grayson, M. H. Controls for lung dendritic cell maturation and migration during respiratory viral infection. J Immunol. 179, 1438-1438 (2007).
- GeurtsvanKessel, C. H., Lambrecht, B. N. Division of labor between dendritic cell subsets of the lung. Mucosal Immunol. 1, 442-442 (2008).
- Bar-Haim, E. Interrelationship between dendritic cell trafficking and Francisella tularensis dissemination following airway infection. PLoS Pathog. 4, e1000211-e1000211 (2008).
- Kim, T. S., Braciale, T. J. Respiratory dendritic cell subsets differ in their capacity to support the induction of virus-specific cytotoxic CD8+ T cell responses. PLoS One. 4, e4204-e4204 (2009).
- Bakocevic, N., Worbs, T., Davalos-Misslitz, A., Forster, R. T cell-dendritic cell interaction dynamics during the induction of respiratory tolerance and immunity. J Immunol. 184, 1317-1317 (2010).
- Thomas, R. J. Influence of particle size on the pathology and efficacy of vaccination in a murine model of inhalational anthrax. J Med Microbiol. , (2010).
- Kiyono, H., Fukuyama, S. NALT- versus Peyer’s-patch-mediated mucosal immunity. Nat Rev Immunol. 4, 699-699 (2004).
- Parungo, C. P. Lymphatic drainage of the peritoneal space: a pattern dependent on bowel lymphatics. Ann Surg Oncol. 14, 286-286 (2007).
- Jakubzick, C., Helft, J., Kaplan, T. J., Randolph, G. J. Optimization of methods to study pulmonary dendritic cell migration reveals distinct capacities of DC subsets to acquire soluble versus particulate antigen. J Immunol Methods. 337, 121-121 (2008).
- Higgins, D. M. Relative levels of M-CSF and GM-CSF influence the specific generation of macrophage populations during infection with Mycobacterium tuberculosis. J Immunol. 180, 4892-4892 (2008).
- Kool, M. Alum adjuvant boosts adaptive immunity by inducing uric acid and activating inflammatory dendritic cells. J Exp Med. 205, 869-869 (2008).
- Costa, D. L., Lehmann, J. R., Harold, W. M., Drew, R. T. Transoral tracheal intubation of rodents using a fiberoptic laryngoscope. Lab Anim Sci. 36, 256-256 (1986).
- Takahashi, S., Patrick, G. Patterns of lymphatic drainage to individual thoracic and cervical lymph nodes in the rat. Lab Anim. 21, 31-31 (1987).
- Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: Descriptive study and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice. J Immunol Methods. 312, 12-12 (2006).
