3D spheroids की पीढ़ी के लिए एक सरल हैंगिंग ड्रॉप सेल संस्कृति प्रोटोकॉल
Summary
हम एक सरल, 3D ऊतक की तरह spheroids और उनके संभावित आवेदन पैदा करने के लिए सेल सेल बातचीत में मतभेद यों के तेजी से विधि का वर्णन.
Abstract
सेल सेल सामंजस्य और सेल बुनियाद आसंजन के अध्ययन ऐतिहासिक monolayer कठोर substrates के अनुयायी संस्कृतियों पर प्रदर्शन किया गया है. एक ऊतक के भीतर कक्ष, तथापि, आम तौर पर एक पैक निकट ऊतक मास में जो कोशिकाओं को बहुत निकट पड़ोसियों के साथ और बाह्य मैट्रिक्स घटकों के साथ अंतरंग कनेक्शन स्थापित के भीतर encased हैं. तदनुसार, रासायनिक परिवेश और शारीरिक एक 3D ऊतक के भीतर कोशिकाओं द्वारा अनुभवी बलों मौलिक monolayer संस्कृति में विकसित कोशिकाओं द्वारा अनुभवी उन से अलग हैं. यह स्पष्ट रूप से सेलुलर आकारिकी और संकेत प्रभाव दिखाया गया है. कई तरीकों कोलेजन 1 जैल में biomaterial scaffolds में 2 या कक्षों की encapsulation सहित 3 डी सेल संस्कृतियों उत्पन्न करने के लिए तैयार किया गया है. इस तरह के तरीकों, जबकि उपयोगी, अंतरंग प्रत्यक्ष आसंजन सेल सेल के सामान्य ऊतकों में पाया वास्तुकला नहीं पुनरावृत्ति करते हैं. बल्कि, वे और अधिक बारीकी से अनुमानित संस्कृति प्रणालियों में जो एकल कक्षों शिथिल ईसीएम उत्पादों की एक 3D meshwork के भीतर बिखरे हैं. यहाँ, हम एक सरल विधि है जिसमें कोशिकाओं को फांसी ड्रॉप संस्कृति में रखा जाता है और शारीरिक शर्तों के तहत incubated जब तक वे सच 3D spheroids में जो कोशिकाओं को एक दूसरे के साथ और बाह्य मैट्रिक्स घटकों के साथ सीधे संपर्क में रहे हैं के रूप में वर्णन. विधि कोई विशेष उपकरणों की आवश्यकता है और बहुत छोटी मात्रा में है कि ब्याज की सेल कोशिका या सेल ECM बातचीत पर प्रभाव elucidating में हो सकता है किसी भी जैविक एजेंट के अलावा शामिल करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. विधि को भी दो सह संस्कृति (या अधिक) के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है अलग अलग सेल आबादी इतनी के रूप में कोशिकाओं के बीच स्थानिक रिश्तों निर्दिष्ट में सेल कोशिका या सेल ईसीएम बातचीत की भूमिका को स्पष्ट करने के लिए. सेल सेल सामंजस्य और सेल ECM आसंजन भ्रूण के विकास, ट्यूमर stromal घातक आक्रमण, घाव भरने, और ऊतक इंजीनियरिंग के लिए अनुप्रयोगों के लिए में सेल बातचीत के अध्ययन के cornerstones हैं. इस सरल विधि biomechanical गुणों की माप के लिए या एक physiologically प्रासंगिक मॉडल में आणविक और जैव रासायनिक विश्लेषण के लिए सेलुलर समुच्चय की तरह ऊतक पैदा करने के साधन प्रदान करेगा.
Protocol
Discussion
अध्ययनों से पता चला है कि एक तीन आयामी (3 डी) संदर्भ में संवर्धन कोशिकाओं को अलग सेलुलर आकारिकी और संकेत है जब एक कठोर दो आयामी (2d) संस्कृति 9 प्रणाली की तुलना में उत्पादन. उदाहरण के लिए, fibroblast आबादी कोलेज?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक के लिए तकनीकी सहायता के लिए डॉ. Dongxuan जिया धन्यवाद देना चाहूंगा. इस लेख में प्रदर्शित होने के कुछ छवियों डॉ. मैल्कम एस स्टाइनबर्ग, आण्विक जीवविज्ञान विभाग, प्रिंसटन विश्वविद्यालय के साथ सहयोग में थे. लेखक भी रक्षा प्रोस्टेट कैंसर रिसर्च प्रोग्राम (पीसी 030,482 अनुदान और पीसी 991,552) के विभाग और / NCI NIH (R01CA118755 अनुदान) अपने उदार सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
- automatic cell counter (BioRad TC10)
- shaking water bath with CO2 gable cover Model 3540 (Lab-line)
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