Signalisation de l'insuline conservées voies trouvés dans la mouche des fruits Drosophila melanogaster Faire de cet organisme un outil potentiel pour la modélisation des troubles métaboliques, notamment le diabète de type II. À cette fin, il est essentiel d'établir des analyses physiologiques pour mesurer efficacement l'insuline d'action systémique dans l'élimination du glucose périphérique dans la mouche adulte.
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Article de méthode
Injection d'insuline et d'extraction hémolymphe pour mesurer la sensibilité d'insuline dans les adultes Drosophila melanogaster
Dans cet article
Résumé
Résumé
Conservé en nutriments des mécanismes de détection existent entre les mammifères et la mouche des fruits, où les peptides ressemblant d'insuline et de glucagon chez les mammifères, respectivement la fonction de maintenir l'homéostasie du glucose au cours du développement 1,2 stades larvaires. Les études sur les mouches adultes largement post-mitotiques ont révélé une perturbation de l'homéostasie du glucose comme le résultat d'ablation génétique de l'insuline-like peptide (PAI) de cellules productrices (IPC) 3. Ainsi, les mouches à fruits pour adultes sont très prometteurs en tant que système modèle génétique adapté à des troubles métaboliques, y compris le diabète de type II. Pour développer davantage le système de la mouche des fruits, des dosages physiologiques comparables utilisés pour mesurer la tolérance au glucose et la sensibilité à l'insuline chez les mammifères doivent être établis. À cette fin, nous avons récemment décrit une nouvelle procédure pour la mesure de la réponse orale de tolérance au glucose chez la mouche adulte et démontré l'importance d'IPC pour adultes dans le maintien de l'homéostasie du glucose 4,5. Ici, nous avons modifié la procédure décrite précédemment pour 6 injections d'insuline et l'a combiné avec une méthode d'extraction hémolymphe roman pour mesurer la sensibilité périphérique à l'insuline chez la mouche adulte. Unique, notre protocole permet des mesures physiologiques directs de la capacité de la mouche adulte est de disposer d'une charge en glucose périphériques après injection d'insuline, une méthodologie qui rend possible de caractériser les mutants signalisation de l'insuline et les interventions possibles concernant la tolérance au glucose et la sensibilité à l'insuline chez la mouche adulte.
Protocole
1. Préparation de la solution d'insuline
- Préparer une nouvelle solution insuline bovine en dissolvant l'insuline dans le PBS pour obtenir la concentration de 0,01 mg / ml. L'insuline / PBS et le contrôle des solutions PBS doit être conservé sur la glace pendant toute la procédure d'injection. Ces solutions doivent être préparées avec 0,5% (v / v) bleu FD & C non. 1 colorant alimentaire.
2. Préparation d'aiguille et l'injection Set-up
- Préparer des aiguilles de verre capillaire en utilisant une micropipette puller.The réglages suivants extracteur produire des aiguilles d'une qualité suffisante pour l'injection: l....
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Discussion
La technique décrite dans ce rapport est potentiellement utile dans toute étude qui examine les processus physiologiques entraînant des altérations décelables dans la composition de l'hémolymphe de drosophile. En combinant l'injection et la collecte de l'hémolymphe de cette manière, il est possible de déterminer les effets immédiats physiologiquement pertinents d'un traitement expérimental particulier ou de manipulation. Le principal avantage de cette «saignée» la technique dans la collecte de l.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par des subventions de la NIA à YW.CF (AG21068, AG31086).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Nom du réactif / équipements | Société | Numéro de catalogue | |
| L'insuline bovine | Sigma | I5500 | |
| Réactif du glucose Infinity | Thermo Electron Corporation | TR1541 | |
| Manuel microinjecteur | Instrument Sutter | ||
| P-87 Flamming / Brown micropipette extracteur | Instrument Sutter | ||
| Simple cylindre en verre de borosilicate capillaires | Systèmes AM | 626000 | |
| FD & C bleu n º 1 | McCormick & Company | ||
| 1 pl tubes microcapillaires | Drummond | ||
| Micromanipulateur manuelle à trois axes et de la base | Instruments de précision du monde |
Références
- Rulifson, E. J., Kim, S. K., Nusse, R. Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes. Science. 296, 1118-1118 (2002).
- Kim, S. K., Rulifson, E. J. Conserved mechanisms of glucose sensing and regulation by Drosophila corpora c....
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Réimpressions et autorisations
