पूर्व प्राथमिक मानव फैलोपियन ट्यूब उपकला कोशिकाओं के Vivo संस्कृति
Summary
फैलोपियन ट्यूब (एफटी) मूल के तरल डिम्बग्रंथि कार्सिनोमा (समाज) के लिए एक वैकल्पिक स्थल के रूप में उभर रहा है. इस प्रोटोकॉल के अलगाव के लिए एक उपन्यास विधि का वर्णन करता है और<em> पूर्व vivo</em> फैलोपियन ट्यूब उपकला कोशिकाओं के संस्कृति. इस प्रणाली का स्मरण दिलाता है<em> Vivo में</em> और उपकला समाज रोगजनन के अध्ययन की अनुमति देता है.
Abstract
उपकला डिम्बग्रंथि के कैंसर संयुक्त राज्य अमेरिका में महिला कैंसर मृत्यु दर का एक प्रमुख कारण है. अन्य महिलाओं विशिष्ट कैंसर के विपरीत, स्तन और गर्भाशय के कार्सिनोमा है, जहां मृत्यु दर में हाल के वर्षों में गिर गया है की तरह, डिम्बग्रंथि के कैंसर का इलाज दरों अपेक्षाकृत पिछले दो दशकों से अधिक 1 अपरिवर्तित बनी हुई है. यह बड़े पैमाने पर प्रारंभिक स्तर रोग जहाँ सर्जरी और कीमोथेरेपी सबसे 2 प्रभावी है, 3 का पता लगाने के के लिए उपयुक्त स्क्रीनिंग उपकरणों की कमी के कारण है. एक परिणाम के रूप में, सबसे अधिक रोगियों के उन्नत चरण रोग और फैलाना पेट भागीदारी के साथ प्रस्तुत करते हैं. यह आगे तथ्य यह है कि डिम्बग्रंथि के कैंसर के कई histologic उपप्रकारों 4, 5 के साथ एक विषम बीमारी है द्वारा जटिल है . तरल डिम्बग्रंथि कार्सिनोमा (समाज) सबसे आम है और आक्रामक subtype और सबसे अक्सर BRCA जीन में परिवर्तन के साथ जुड़ा हुआ है. इस क्षेत्र में अभी प्रयोगात्मक मॉडल कैंसर कोशिका लाइनों और माउस मॉडल का उपयोग शामिल करने के लिए बेहतर शुरुआत आनुवंशिक घटनाओं और रोग 6, 7 के रोगजनन को समझने . हाल ही में, फैलोपियन ट्यूब समाज की उत्पत्ति के लिए एक उपन्यास साइट के रूप में उभरा है फैलोपियन (एफटी) मूल 8, 9 की प्रस्तावित सेल के रूप में ट्यूब स्रावी उपकला कोशिका (FTSEC ) के साथ. वहाँ वर्तमान में कर रहे हैं कोई सेल लाइनों या संस्कृति एफटी उपकला या FTSEC का अध्ययन करने के लिए उपलब्ध है सिस्टम. यहाँ हम एक उपन्यास पूर्व vivo संस्कृति प्रणाली है जहां प्राथमिक मानव एफटी उपकला कोशिकाओं एक तरह से है कि उनकी वास्तुकला, polarity, immunophenotype, और शारीरिक और genotoxic तनाव के लिए प्रतिक्रिया को बरकरार रखता है में सुसंस्कृत हैं का वर्णन करता है. इस पूर्व vivo मॉडल समाज के अध्ययन के लिए एक उपयोगी उपकरण प्रदान करता है, कैसे ट्यूमर इस ऊतक से पैदा कर सकते हैं की एक बेहतर समझ की अनुमति, और तंत्र ट्यूमर दीक्षा और प्रगति में शामिल है.
Protocol
Discussion
समाज के लिए मूल के एक उम्मीदवार की साइट के रूप में एफटी की पहचान ज्ञात जोखिम कारकों और वास्तविक तरल कासीनजन प्रक्रिया को जोड़ने तंत्र का गूढ़ रहस्य के उद्देश्य से बुनियादी और translational अनुसंधान के लिए अवसर प्रदान करता है. इस के लिए क्रिटिकल विनयशील मॉडल प्रणाली के विकास कि हमें परिकल्पना है कि FTSEC श्रोणि तरल कार्सिनोमा के लिए एक सेल के मूल है परीक्षण शुरू करने के लिए सक्षम हो जाएगा है. पूर्व vivo संस्कृति मॉडल के साथ साथ वर्णित एक उपन्यास प्रणाली है कि एक तरह से है कि आकारिकी और देशी एफटी उपकला के जीव विज्ञान को बरकरार रखता है और प्राथमिक एफटी स्रावी और रोमक कोशिकाओं के सह संस्कृति अलगाव परमिट है. इस प्रणाली का उपयोग करना, हम हाल ही में इस उपकला के secretome विशेषता और उपकला यांत्रिक और genotoxic 10 चोट करने के लिए कैसे प्रतिक्रिया. Ovulation, डिम्बग्रंथि tumorigenesis के साथ जुड़े एक प्रमुख जोखिम कारक, ऊतक चोट, सूजन मध्यस्थों, वृद्धि कारक, और 11 हार्मोन का एक संयोजन द्वारा विशेषता है . इस प्रणाली और स्रावी और रोमक कोशिकाओं की प्रतिक्रिया और व्यवहार्यता पर एक ovulatory परिवेश के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसके अलावा, अन्य प्रकार की कोशिकाओं (यानी भड़काऊ कोशिकाओं) के प्रभाव के लिए घटनाओं का एक बेहतर समझ की अनुमति देने के लिए जांच की जा सकता है कि ड्राइव सेल प्रकार भेदभाव और कारक है कि इन कोशिकाओं के neoplastic परिवर्तन के लिए योगदान. इसी तरह के मॉडल के अन्य ऊतकों में वर्णित किया गया है जहां polarized उपकला मौजूद है. उदाहरण के लिए, airway उपकला polarized प्राथमिक संस्कृतियों में सेल के विकास और सेलुलर चोट के जवाब पर heregulin के प्रभाव 12 मूल्यांकन किया गया था. मॉडल प्रणाली के इन प्रकार दीक्षा और ट्यूमर है जो उपकला ऊतकों से उत्पन्न के रोगजनन के अध्ययन के लिए एक नए और उपयोगी तरीका प्रदान करते हैं, और इस एफटी जहां कोई सेल लाइनों वर्तमान में मौजूद हैं जैसे ऊतकों में महत्वपूर्ण महत्व का है, और जहाँ वहाँ एक महान है कुंजी रास्ते की पहचान और उपन्यास उपचार कार्यनीतियों के विकास के लिए की जरूरत है.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम संकाय, साथियों, निवासियों, और ब्रिघम और महिला अस्पताल के चिकित्सक सहायकों, पैथोलॉजी विभाग ऊतक इन अध्ययनों के लिए उपलब्ध बनाने के लिए धन्यवाद. यह काम NIH / राष्ट्रीय कैंसर संस्थान (CA105009 P50, CA108748 K08, CA152990 U01), डिम्बग्रंथि के कैंसर रिसर्च फंड से अनुदान अनुसंधान द्वारा समर्थित किया गया Kay फाउंडेशन, नोवार्टिस फार्मास्यूटिकल्स, रॉबर्ट और Deborah पहले फंड, Randi और योएल कटलर डिम्बग्रंथि के कैंसर मई रिसर्च फंड, मार्शा Rivkin फाउंडेशन – वैज्ञानिक विद्वान पुरस्कार, AACR – जॉर्ज और कैंसर आनुवंशिकी अनुसंधान के लिए पेट्रीसिया Sehl फैलोशिप, और इस्राएल में चिकित्सा के लिए अमेरिकी चिकित्सकों फैलोशिप क्लेयर और Emmanuel जी Rosenblatt फाउंडेशन अनुदान.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Collagen from human placenta (Bornstein and Traub Type IV) | Sigma | C7521 | ||
| DMEM:F12 media | Cellgro | 15-090-CV | ||
| Ultroser G | Crescent Chemical Company | 67042 | Add 20 ml of DMEM:F12 to stock bottle and use 10mls per 500 ml of media (2% final concentration) | |
| Pen Strep | Invitrogen | 15140-122 | ||
| BD Primaria culture plates | BD Bioscience | 353802 | ||
| 24 well Transwell Permeable supports | Corning (Costar) | 3470 | Clear, 6.5 mm insert, 0.4 μm pore size, treated polyester | |
| MEM (Minimal Essential Media) | Cellgro | 10-010-CV | ||
| Pronase | Roche | 11459643001 | ||
| DNAse | Sigma | DN25 | ||
| Sall2 antibody | Dr T. Benjamin, Harvard | Gift | 1:20 dilution | |
| Pax8 antibody | Proteintech | 10336-1-AP | 1: 1000 dilution |
References
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