조직 표면 Tensiometry에 의해 집계 응집력의 측정
Summary
우리는 3D 조직과 같은 집계 내의 세포 사이 조직 표면 장력으로 표현할 수있는 바인딩 에너지를 측정하는 방법을 설명합니다. 조직 표면 장력의 차이는 폐, 근육, 뇌 종양의 invasiveness와 연관시키는 시연하고, 다른 세포 유형 간의 공간 관계를 설립의 근본 determinants 아르되었습니다.
Abstract
세포 바인딩 에너지의 엄격한 측정은 평형에 시스템의 열역학적 원리에 기초 방법을 사용하여 만들 수 있습니다. 우리는 구체적으로 세포 사이의 상호 작용의 표면 자유 에너지를 측정하기 위해 조직 표면 tensiometry (TST)를 개발했습니다. TST를 기본 biophysical 개념은 이전에 세부 사항 1,2에 설명되어있다. 방법은 서로 응집 세포가 문화를 흔들림 유지한다면, 저절로 클러스터로 조립 것이라는 관측에 따라 달라집니다. 시간이지나면서,이 클러스터는 분야를 형성 모아 것입니다. 이 라운딩 – 최대 동작은 액체 시스템의 동작 특성을 모방한 것이었 지요. 세포 바인딩 에너지는 맞춤 설계 조직 표면 tensiometer의 병렬 플레이트 사이의 구형 집합체를 압축하여 측정됩니다. 액체 작은 물방울의 표면 장력을 측정하는 데 사용되는 동일한 수학적 방정식은 3 차원의 조직과 같은 구형 집계의 표면 장력을 측정하는 데 사용됩니다. 액체 표면 장력의 세포 이에 상응하는 세포 바인딩 에너지, 또는 그 이상 일반적으로 조직 cohesivity입니다. 저희 연구실에서 이전 연구는 배아 세포의 두 그룹이 서로 1-5와 상호 작용하는 것입니다 (2) 강하게 (3) 수 biomaterials 6 상호 작용하는 조직의 능력에 영향을 미칠 수있는 방법을 조직 표면 장력 (1) 예측하는 것으로 나타났습니다 뿐만 아니라 cadherin 기반 세포 응집 7 직접적인 조작을 통해, 또한 같은 FN 8-11 4 등 주요 ECM 분자)의 조작에 의해 변경될 수하면 폐암 암 12, fibrosarcoma 13, 뇌종양 14 전립선 종양의 침략 가능성과 연결합니다 셀 라인 15. 이 문서에서 우리는 장치, 세부 spheroids를 생성하는 데 필요한 단계, tensiometer 챔버에 spheroids를로드 집계 압축을 시작하고, 생성된 조직 표면 장력 측정을 분석하고 검증을 설명합니다.
Protocol
Discussion
TST로 집계 결합을 측정하는 것은 비교적 간단합니다. 유용한 TST 데이터를 생성하기 위해서는 마스터해야합니다 주요 단계는, 그러나,있다; 1) 집계는 "건강"해야합니다. 이것은 집계 형성이 분리하기 전에 최적의 합류에있다 세포로 시작함으로써 제어할 수 있습니다. 문화 집계 크기와 시간도 집계 이내에 괴사 코어의 개발을 최소화하기 위해 통제되어야하며 2) TST 측정에 영향을 미칠 수?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
- water bath/shaker (New Brunswick Scientific, Edison, NJ)
- 10 ml round-bottom flasks (Belco, Vineland, NJ)
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