努力找出端粒酶的催化亚基,叔,足够数量结构研究,已会见了十余有限的成功。在这里,我们目前的重组赤拟谷盗叔隔离的方法(<em> TC</em>叔)和重组活动<em> T。谷盗</em>端粒酶的核糖核蛋白(RNP)复合物<em>在体外</em>。
努力找出端粒酶的催化亚基,叔,足够数量结构研究,已会见了十余有限的成功。在这里,我们目前的重组赤拟谷盗叔(TC叔)的分离和重组的积极 T.方法谷盗端粒酶的核糖核蛋白(RNP)复合物在体外 。
端粒酶是一个专门的反转录酶1,增加了短的DNA重复序列,称为端粒,线性染色体 2,有利于保护他们从终端到终端的融合和退化的3'端。短段DNA复制,失去了在3号染色体的结束,如果没有端粒酶,细胞继续分裂,直至最终达到他们海弗利克极限4。此外,端粒酶在大多数体细胞在成人的 5中处于休眠状态,但活跃于癌细胞,促进细胞不死7。
最小的端粒酶由两个核心部分组成:蛋白亚基(叔),其中包括酶的催化亚基和一个完整的RNA组分(TER),其中包含的模板叔使用合成端粒8,9。在2008年之前,只有个别端粒酶域的结构已经解决了10,11。在这一领域的一个重大突破来自活跃的 12晶体结构测定,T的催化亚基谷盗端粒酶,TC叔1。
在这里,我们目前生产大量的活性,可溶性TC叔结构和生化研究,并重组端粒酶活性检测端粒酶在体外的RNP复杂的方法。使用的实验方法概述如图1所示。
这里介绍的方法可以为大量生产的T 的催化亚基谷盗可溶性活性形式,结构和生化研究端粒酶叔。 TC叔过度表达的方法是敏感微妙的变化,在温度或从上述这些细胞密度和蛋白表达水平可以显着地影响。具体来说,我们发现,诱导蛋白表达的细胞之前,在600 nm的光密度达到0.5,或降低温度至30 ° C诱导前,在蛋白质产量显着减少。
在净化方面,TC叔蛋…
The authors have nothing to disclose.
这里介绍的研究是由宾夕法尼亚州的卫生署,埃利森医学,V和祖母绿基础支持。