Metodo di particelle agglutinazione per l'identificazione Poliovirus
Summary
Un recente sviluppo di particelle romanzo agglutinazione (PA) test utilizzando molecola recettore del virus ha permesso l'identificazione rapida e facile dei poliovirus (PV). In questo articolo mostreremo la procedura per il saggio PA per l'identificazione fotovoltaico.
Abstract
Nel Global Polio Eradication Initiative, diagnosi di laboratorio svolge un ruolo critico, isolando e identificando PV dai campioni di feci di paralisi flaccida acuta (AFP) casi. Nel Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) Global Polio Laboratory Network, PV isolamento e l'identificazione sono attualmente in corso, utilizzando la cultura sistema di celle e real-time RT-PCR, rispettivamente. Nell'era post-eradicazione era del fotovoltaico, procedure di identificazione semplice e rapida sarebbe utile per una rapida conferma di casi di polio presso i laboratori nazionali. Nel presente studio, mostreremo la procedura di test romanzo PA sviluppato per l'identificazione fotovoltaico. Questo test PA utilizza l'interazione del recettore PV (PVR) e virione molecola che è specifica affinità e uniforme a tutti i sierotipi del fotovoltaico. La procedura è semplice (una procedura passo in lastre di reazione) e rapido (risultati possono essere ottenuti entro 2 h di reazione), e il risultato è visivamente osservato (osservazione di agglutinazione di particelle di gelatina).
Protocol
Discussion
L'unico punto di questo test PA è l'utilizzo della molecola PVR invece di anticorpi anti-PV per il rilevamento di PV 2. Questo consente una specifica interazione delle particelle di gelatina sensibilizzata con PV con una affinità uniforme per tutti e tre i sierotipi di PV 3-6. Abbiamo usato una forma immunoadhesin di PVR (PVR-IgG2a) per la sensibilizzazione delle particelle di gelatina, in quanto forme monomeriche di PVR hanno solo affinità moderata al singolo sito vincolanti per le virione (costan…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Siamo grati a Junko Wada per la sua eccellente assistenza tecnica. Siamo grati al Prof. Akio Nomoto per la gentile fornendo un vettore di espressione baculovirus per PVR-IgG2a. Questo studio è stato sostenuto in parte da sovvenzioni-in-Aid per la promozione della eradicazione della polio e della Ricerca sulle emergenti e riemergenti Malattie Infettive del Ministero della Salute, del Lavoro e del Welfare.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Sensitized-gelatin particles | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Reconstitution buffer | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Microtitration plate | Fujirebio Inc. | Test kit | |
| Anti-PV antibody | RIVM |
References
- World Health Organization. . Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , (2004).
- Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. J. Clin. Microbiol. 48, 2698-2702 (2010).
- Bibb, J. A., Witherell, G., Bernhardt, G., Wimmer, E. Interaction of poliovirus with its cell surface binding site. Virology. 201, 107-115 (1994).
- Koike, S. The poliovirus receptor protein is produced both as membrane-bound and secreted forms. Embo J. 9. , 3217-3224 (1990).
- Mendelsohn, C. Transformation of a human poliovirus receptor gene into mouse cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 83, 7845-7849 (1986).
- Mendelsohn, C. L., Wimmer, E., Racaniello, V. R. Cellular receptor for poliovirus: molecular cloning, nucleotide sequence, and expression of a new member of the immunoglobulin superfamily. Cell. 56, 855-865 (1989).
- Arita, M., Koike, S., Aoki, J., Horie, H., Nomoto, A. Interaction of poliovirus with its purified receptor and conformational alteration in the virion. J. Virol. 72, 3578-3586 (1998).
- McDermott, B. M., Rux, A. H., Eisenberg, R. J., Cohen, G. H., Racaniello, V. R. Two distinct binding affinities of poliovirus for its cellular receptor. J. Biol. Chem. 275, 23089-23096 (2000).
- Pipkin, P. A., Wood, D. J., Racaniello, V. R., Minor, P. D. Characterisation of L cells expressing the human poliovirus receptor for the specific detection of polioviruses in vitro. J. Virol. Methods. 41, 333-340 (1993).
- Avoort, H. G. v. a. n. d. e. r. Comparative study of five methods for intratypic differentiation of polioviruses. J. Clin. Microbiol. 33, 2562-2566 (1995).
- Kilpatrick, D. R. Rapid group-, serotype-, and vaccine strain-specific identification of poliovirus isolates by real-time reverse transcription-PCR using degenerate primers and probes containing deoxyinosine residues. J. Clin. Microbiol. 47, 1939-1941 (2009).
