Внутрипросветный средней мозговой артерии (MCAO) Модель развития ишемического инсульта с лазерной допплеровской флоуметрии Руководство у мышей
Summary
Внутрипросветный средней мозговой артерии (MCAO) модель является наиболее часто используемой моделью среди экспериментальных моделях ишемического инсульта. Здесь мы покажем всей модели в деталях с проводником лазерной доплеровской флоуметрии, и результаты ее представитель.
Abstract
Инсульт является третьей ведущей причиной смерти и ведущей причиной инвалидности в мире, по оценкам, стоимость около $ 70 млрд. в Соединенных Штатах в 2009 году 1,2. Внутрипросветный средней мозговой артерии (MCAO) модель была разработана Коидзуми 4 в 1986 году для имитации этого впечатляющие патологии человека в крысу. Модификация метода MCAO позже представленных Лонга 3. Оба метода широко используются для определения молекулярных механизмов повреждения мозга в результате ишемического инсульта и потенциальные терапевтические методы 5. Этот относительно неинвазивный метод у крыс был расширен для использования на мышах, чтобы воспользоваться трансгенных и нокаут штаммов 6,7. Для моделирования координационного церебральная ишемия, внутрипросветного шов с помощью передовых внутренней сонной артерии, чтобы закупорить базе MCA. Втягивания шва после определенного периода времени имитирует спонтанной реперфузии, но шов может также быть постоянно сохранена. Это видео будет демонстрировать двух основных подходов к проведению процедуры внутрипросветный MCAO у мышей в ступенчато, а также предоставляет информацию для потенциальных недостатков и ошибок. Ишемический мозговой ткани впоследствии будет запятнана 2,3,5-triphenyltetrazolium хлорида (ТТК), чтобы оценить степень инфаркт мозга 8.
Protocol
Discussion
Модель MCAO является признанным модель, которая воспроизводит ишемии головного мозга у мышей вида. Эта модель впервые была использована в крыс, а затем адаптированных к мышам. Как избежать удаление фрагментов костей черепа, чтобы исключить влияние хирургических манипуляций на проницае?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|---|
| Male C57BL/6 mice | Animal | Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA | 20-26 grs | |
| Dissection microscope | Microscope | Leica stereo Microscope MZ6 | 6.3:1 zoom | |
| Fiber optic illuminator | Illuminator | TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA | FO1–150 | |
| Isoflurane | Anesthesia | Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL | 1001936060 | |
| SuperCut Iris scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14218 | |
| Vannas micro-scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14003 | |
| Dumont fine tip forceps | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 503290 | |
| Vessel clip | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14120 | |
| High Frequency Desiccator 900 | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 500397 | |
| 7-0 surgical Nylon monofilament suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 1647G | Suture for occlusion |
| 7-0 surgical Silk suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 7733G | Suture for ligation |
| Silicone RTV adhesive | Silicone rubber | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 1571 | |
| Vetbond | Tissue adhesive | 3M Company, St Paul, MN, USA | 70200746587 | |
| Puralube Vet Ointment | Eye ointment | Pharmaderm, Melville, NY, USA | ||
| Buprenorphine hydrochlorode | Analgesics | Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA | NDC 0409-2012-32 | |
| Thermal Cautery Unit | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 501292 | ||
| PeriFlux System 5000 | TCD flowmetry | Perimed, Stockholm, Sweeden | ||
| BAT-12 | Rectal thermometer | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | BAT-12R | |
| T/PUMP, TP600 | Thermal blanket | Gaymar, NY, USA | ||
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Reagent | Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA | T8877 | |
| Mice brain matrix slicer | Brain slicer | Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA | BSMAS001-1 |
References
- . Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).
- Lloyd-Jones, D. Heart disease and stroke statistics–2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, e21-e181 (2009).
- Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).
- Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).
- Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurol Res. 19, 641-648 (1997).
- Fujii, M. Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. . Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).
- Bederson, J. B. Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).
- Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury. Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).
- Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy. J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).
- Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice. Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).
- Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).
- Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?. Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).
