Intraluminal artéria cerebral média Oclusão Model (MCAO) para Acidente Vascular Cerebral Isquêmico com Laser Doppler Fluxometria Orientação em Ratos
Summary
O intraluminal cerebral média de oclusão da artéria modelo (MCAO) é o modelo mais freqüente dentre os modelos experimentais acidente vascular cerebral isquêmico. Aqui vamos demonstrar todo o modelo em detalhes com o guia de Laser Doppler fluxometria, e os resultados do seu representante.
Abstract
AVC é a terceira principal causa de morte e a principal causa de incapacidade no mundo, com um custo estimado de perto de US $ 70 bilhões nos Estados Unidos em 2009 1,2. O intraluminal cerebral média de oclusão da artéria modelo (MCAO) foi desenvolvido por Koizumi 4 em 1986 para simular esta patologia de grande impacto humano no rato. A modificação do método de MCAO mais tarde foi apresentado por Longa 3. Ambas as técnicas têm sido amplamente utilizados para identificar mecanismos moleculares de lesão cerebral resultante de acidente vascular cerebral isquêmico e potencial modalidades terapêuticas 5. Este método relativamente não-invasivo em ratos foi estendido para uso em camundongos para tirar proveito de transgênicos e knockout cepas 6,7. À isquemia focal modelo cerebral, uma sutura intraluminal é avançado através da artéria carótida interna para ocluir a base do MCA. Retração da sutura, após um período de tempo especificado imita reperfusão espontânea, mas a sutura pode também ser mantida em permanência. Este vídeo estará demonstrando as duas abordagens principais para a realização de procedimento MCAO intraluminal em ratos de forma gradual, bem como fornecer insights para potenciais inconvenientes e perigos. O tecido cerebral isquêmico, posteriormente, ser manchada por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto (TTC) para avaliar a extensão do infarto cerebral 8.
Protocol
Discussion
O modelo MCAO é um modelo estabelecido que replica isquemia cerebral em espécies murina. Este modelo foi usado pela primeira vez em ratos e, posteriormente adaptado para ratos. Evitando craniectomia para eliminar a influência da manipulação cirúrgica na permeabilidade da barreira do sangue cerebral e pressão intracraniana é uma vantagem desta técnica. No entanto, muitas variáveis, tais como tensão diferenças relacionadas 10, tamanho da ponta de sutura 11, a duração da oclusão 6,…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|---|
| Male C57BL/6 mice | Animal | Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA | 20-26 grs | |
| Dissection microscope | Microscope | Leica stereo Microscope MZ6 | 6.3:1 zoom | |
| Fiber optic illuminator | Illuminator | TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA | FO1–150 | |
| Isoflurane | Anesthesia | Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL | 1001936060 | |
| SuperCut Iris scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14218 | |
| Vannas micro-scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14003 | |
| Dumont fine tip forceps | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 503290 | |
| Vessel clip | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14120 | |
| High Frequency Desiccator 900 | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 500397 | |
| 7-0 surgical Nylon monofilament suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 1647G | Suture for occlusion |
| 7-0 surgical Silk suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 7733G | Suture for ligation |
| Silicone RTV adhesive | Silicone rubber | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 1571 | |
| Vetbond | Tissue adhesive | 3M Company, St Paul, MN, USA | 70200746587 | |
| Puralube Vet Ointment | Eye ointment | Pharmaderm, Melville, NY, USA | ||
| Buprenorphine hydrochlorode | Analgesics | Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA | NDC 0409-2012-32 | |
| Thermal Cautery Unit | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 501292 | ||
| PeriFlux System 5000 | TCD flowmetry | Perimed, Stockholm, Sweeden | ||
| BAT-12 | Rectal thermometer | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | BAT-12R | |
| T/PUMP, TP600 | Thermal blanket | Gaymar, NY, USA | ||
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Reagent | Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA | T8877 | |
| Mice brain matrix slicer | Brain slicer | Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA | BSMAS001-1 |
References
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