Единый Drosophila Омматидия Препарирование и обработка изображений
Summary
Ограничивающим фактором в использовании взрослых<em> Drosophila</em> Глаза на исследование нейродегенерации и клеточной биологии трудно визуализации внутриклеточных процессов. Мы описываем вскрытия одного омматидии генерировать добросовестных первичной культуры клеток нейронов, которые могут быть предметом лечения наркозависимости и Advanced Imaging.
Abstract
Плодовой мушки дрозофилы сделал неоценимый вклад в неврологии исследования и широко используется в качестве образца для нейродегенеративных заболеваний из-за своей мощной генетике 1. Летать глаз, в частности, была органом выбор для нейродегенерации исследования, являясь самым доступным и жизни необязательной частью дрозофилы нервной системы. Однако основные предостережение интактных глаз трудности, из-за интенсивной флуоресценции от пигмента, в визуализации внутриклеточных событий, таких как аутофагии динамики 2, которые имеют огромное значение для понимания нейродегенерации.
Недавно мы использовали вскрытие и культура одного омматидии 3, что имеет огромное значение для нашего понимания autophagic нарушений в летают модель Dentatorubro-Pallidoluysian Атрофия (DRPLA) 3, 4.
Теперь отчет с подробным описанием этого метода (рис. 1), адаптированных с электрофизиологических исследований 5, который, скорее всего, значительного расширения возможности летать модели нейродегенерации. Этот метод может быть адаптирован к изображению живой субклеточных событий и следить за эффективным приемом препаратов на клетки фоторецепторов (рис. 2). При использовании в сочетании с мозаикой методов 6-8, ответы генетически различных клеток может быть проанализированы параллельно (рис. 2).
Protocol
Discussion
Одно рассечение омматидия представленные здесь коллекции позволяет более глубокой биологической ячейки информацию о процессах, как нейродегенеративные, когда моделируется в глазу дрозофилы. Фоторецепторных нейронов более доступной, чем в других нейронов и их цитоплазме особен…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Бернар Charroux для дискуссий. Эта работа финансировалась KCL биомедицинских школы.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
| DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
| 3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
| Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
| Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
| Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
| Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
| Coverslips | VWR | 631-1336 |
References
- Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
- Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. Autophagy fights disease through cellular self-digestion. Nature. 451, 1069-1075 (2008).
- Nisoli, I. Neurodegeneration by polyglutamine Atrophin is not rescued by induction of autophagy. Cell Death Differ. 17, 1577-1587 (2010).
- Charroux, B., Fanto, M. The fine line between waste disposal and recycling: DRPLA fly models illustrate the importance of completing the autophagy cycle for rescuing neurodegeneration. Autophagy. 6, 667-669 (2010).
- Hardie, R. C. Voltage-sensitive potassium channels in Drosophila photoreceptors. J Neurosci. 11, 3079-3095 (1991).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends in neurosciences. 24, 251-254 (2001).
- Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117, 1223-1237 (1993).
- Gambis, A., Dourlen, P., Steller, H., Mollereau, B. Two-color in vivo imaging of photoreceptor apoptosis and development in Drosophila. Dev Biol. 351, 128-1234 (2011).
- Napoletano, F. Polyglutamine Atrophin provokes neurodegeneration in Drosophila by repressing fat. The EMBO journal. 30, 945-958 (2011).
- Ravikumar, B. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nature. 36, 585-595 (2004).
- Zou, S., Meadows, S., Sharp, L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genome-wide study of aging and oxidative stress response in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 13726-13731 (2000).
