Singel Drosophila Ommatidium Dissection och Imaging

Summary

Den begränsande faktorn i användningen av den vuxna<em> Drosophila</em> Öga för att studera neurodegeneration och cellbiologi är svårt avbildning av intracellulära processer. Vi beskriver dissektion av enstaka ommatidia att generera ett ärligt uppsåt primära neuronala cellodling, som kan bli föremål för behandling och avancerad bildbehandling.

Abstract

Bananfluga Drosophila melanogaster har gjort ovärderliga bidrag till neurovetenskaplig forskning och har använts allmänt som en modell för neurodegenerativa sjukdomar på grund av dess kraftfulla genetik ^1. Flugan ögat i synnerhet har orgeln i valet för neurodegeneration forskning, är den mest lättillgängliga och livet onödigt del av Drosophila nervsystemet. Men den stora varning av intakt ögon är svårigheten, på grund av den intensiva autofluorescens av pigment, i bildbehandling intracellulära förlopp, såsom autophagy dynamik ^2, som är utomordentligt viktig för förståelsen av neurodegeneration.

Vi har nyligen använt dissekering och kultur av enstaka ommatidia ³ det har varit viktigt för vår förståelse av autophagic dysfunktioner i en fluga modell av Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofi (DRPLA) ^{3, 4.}

Vi rapporterar nu en omfattande beskrivning av denna teknik (Figur 1), anpassat från elektrofysiologiska studier ^5, vilket sannolikt kommer att öka dramatiskt möjligheten att flyga modeller för neurodegeneration. Denna metod kan anpassas till bilden leva subcellulära händelser och för att övervaka effektivt läkemedel administration på ljusmätare celler (Fig. 2). Om den används i kombination med mosaik tekniker ^6-8, kan svaren från genetiskt olika celler analyseras parallellt (Fig. 2).

Protocol

1. Dissekering av Drosophila näthinnan Fyll en en brunn i en 3-Tja glasskiva med fosfatbuffrad koksaltlösning (PBS 1X) och sedan söva flugor av CO 2. Både hanar och honor kan användas för detta experiment. När flugorna är sövd, plocka upp en enda fluga med hjälp av pincett och släppa den i den lilla skålen med PBS. Enligt en dissekera omfattning, klämma snabel med pincett, och sedan bort huvudet från kroppen genom att bryta nacken med en andra uppsättning…

Discussion

Den enda ommatidium dissektion som presenteras här gör att insamlingen av djupare cellbiologiska information om processer som neurodegeneration, när modelleras i Drosophila ögat. Den fotoreceptor nervceller är mer lättillgängliga än andra nervceller och de cytoplasman är särskilt stor, och därför lämplig att studera vesikler dynamik, i samma celler som används skickligt i många modeller för att kvantifiera neurodegeneration in vivo. Den kritiska aspekten av dissektion är främst förm?…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser	Flystuff	59-150	Refills also available
DUMONT Tweezer No 5	AGAR Scientific	T5034
3-Well Glass Slide	EMS	71561-01
Micro scissors	VWR	HAMMHSB516-09
Schneider’s Medium	VWR	733-1663
LysoTracker Red DND-99	Invitrogen	L7528
Superfrost Slides	VWR	631-0108
Vectashield with Dapi	Vector Labs	H-1200
Coverslips	VWR	631-1336