نبدي تلفيق مرحلة منخفضة التكلفة المبردة مصممة لتناسب معظم المجاهر الضوء المنعكس. هذه المرحلة بناء مختبر التصوير المبردة تمكن المتلازم كفاءة وموثوقية بين البرد الخفيفة والمجهري البرد الإلكترون.
اقتران البرد الخفيفة المجهري (البرد LM) والمجهري البرد الإلكترون (البرد م) تطرح عددا من المزايا لفهم ديناميات الخلوية والترآيب الدقيق. أولا ، يمكن تصوير الخلايا في بيئة الأم على حد سواء بالقرب من التقنيات. الثانية ، وذلك بسبب عملية التزجيج ، هي الحفاظ على العينات التي الشلل المادي السريع بدلا من بطء التثبيت الكيميائي. الثالثة ، والتصوير في نفس العينة مع كل من البرد والبرد LM – EM يوفر ارتباط البيانات من خلية واحدة ، بدلا من المقارنة بين "عينات تمثيلية". بينما يعرف جيدا هذه الفوائد من الدراسات السابقة ، والاستخدام الواسع النطاق للالمتلازم البرد والبرد LM – EM لا يزال محدودا نظرا لتعقيد وحساب شراء أو بناء مناسبة المجهر الضوئي المبردة المرحلة. هنا علينا أن نظهر للجمعية العامة ، واستخدام المرحلة عن المبردة غير مكلفة التي يمكن أن تكون ملفقة في أي مختبر لأقل من 40 دولارا مع الأجزاء التي عثر عليها في الأجهزة المحلية ومحلات البقالة. تم تصميم هذه المرحلة البرد LM للاستخدام مع المجاهر الضوء المنعكس التي يتم تركيبها مع أهداف جوية طويلة في العمل عن بعد. للالمتلازم البرد والدراسات LM – EM البرد ، نكيف استخدام معيار الكربون المغلفة 3 ملم البرد كما يدعم شبكات EM العينة. بعد التكثيف العينة إلى الشبكة ، وتتبع البروتوكولات المعمول بها سابقا لالتزجيج العينة ونقل / مناولة الشبكة للسماح متعددة تقنية التصوير. نتيجة لذلك ، هذا الإعداد يسمح لأي مختبر المجهر مع الضوء المنعكس من الحصول على التصوير المباشر للعينات المترابطة رطب مجمد.
The authors have nothing to disclose.
الكتاب أود أن أشكر براندون J. زيب وكين كابلان باء لتوفير الوصول إلى سلالة الخميرة المستخدمة في هذه الدراسة. ونشكر أيضا كتاب لينين خوليو راميريز دومينغيز لتصوير بالفيديو للحصول على مساعدة. JEE يقر بدعم من المعاهد الوطنية للصحة تمويل عدد المنح 5RC1GM91755.
Table of specific reagents and equipment:
Name | Company | Catalog # | Comments | Cost |
---|---|---|---|---|
1 – 22.86 cm (9″) pie pan with sloped edge | Good Cook | Local grocery store | $4.39 | |
1 – 22.86 cm (9″) cake pan | Good Cook | Local grocery store | $4.93 | |
4 pairs of chopsticks | Local grocery store | $.50 | ||
1 – Great Stuff spray foam | Great Stuff | Local hardware store | $5.98 | |
1 – 4cm x8cm x1cm block of aluminum | Local hardware store or metal scrap yard | $10.00 | ||
5 – #10 1.91 cm (3/4″) flat head slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
3 – #4 0.95 cm (3/8″) round slotted bolts w/ nuts | Local hardware store | $0.98 | ||
15 – #10 washers | Local hardware store | $0.98 | ||
2 – transparent plastic clipboards | Local office store | $6.84 | ||
1 – Cryo-EM grid box holder | Ted Pella | 160-41 | N/A | |
1 – Cryo-EM grid box handling rod | Ted Pella | 160-46 | N/A | |
1 – R2/1 holey carbon film, 400-mesh copper cryo-EM support grid | SPI Supplies | 4340C-XA | N/A |
Experimental materials