Denna metod för att isolera funktionella immunceller från hjärtat ger ett alternativ till konventionella metoder för kollagenas matsmältning, som orsakar oönskade immunceller aktiveras, vilket resulterar i en minskad lyhördhet av dessa celler. Vår metod för isolering ger funktionella hjärt immunceller genom att undvika problem i samband med enzymatisk spjälkning.
Hjärtat immunceller vinner intresse för de roller de spelar i den patologiska remodeling i många hjärtsjukdomar 1-5 Dessa immunceller, som omfattar mastceller, T-celler och makrofager,. Lagra och frigöra en mängd biologiskt aktiva mediatorer, inklusive cytokiner och proteaser som tryptas. 6-8 Dessa mediatorer har visat sig vara viktiga aktörer i extracellulära matrix ämnesomsättningen genom att aktivera metalloproteinaser eller orsakar kollagen ackumulering genom att modulera hjärt fibroblaster "-funktionen. 9-11 dock tillgängliga tekniker för att isolera hjärt immunceller har varit problematiskt eftersom de använder bakteriella kollagenas att smälta myocardial vävnad. Denna teknik medför aktivering av immunceller och därmed en förlust av funktion. Till exempel hjärt mastceller blir betydligt mindre känsliga för ämnen som orsakar degranulering. 12 Därför har vi utvecklat en teknik som gör det möjligt för tHan isolering av funktionella hjärt immunceller som skulle leda till en bättre förståelse för vilken roll dessa celler i hjärtsjukdom. 13, 14
Metoden kräver en förtrogenhet med anatomiska belägenhet råttans xiphoid process, armhålan och falciform ligament och hjärtsäcken i hjärtat. Dessa landmärken är viktigt att öka framgången för förfarandet och att säkerställa en högre avkastning på hjärt immunceller. Dessa isolerade hjärt immunceller kan sedan användas för karakterisering av funktionalitet, fenotyp, mognad, och co-kultur experiment med andra hjärt-celler för att få en bättre förståelse för deras interaktioner.
Denna metod för att isolera hjärt immunceller möjliggör analys av deras funktion, fenotyp, och mognad utan oönskade aktivering som normalt sker under en traditionell enzymatisk spjälkning isolering teknik. Det genomsnittliga totala antalet celler erhålls med denna teknik är ca 400 tusen per råtta hjärta och differentierad färgning och flödescytometri analys av dessa celler visar blandad population av T-lymfocyter (~ 70%), makrofager (~ 12%) och mastceller med användningen av denna teknik. (~ 12%). 13, …
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av en UNCF-Merck Graduate Science Research Disputation Fellowship (JLM), National Heart, Lung, and Blood Institute beviljar RO1-HL-62.228 (JSJ) och RO1-HL-073.990 (JSJ).
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
HEPES | Sigma | H3784 | |
Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |