Denne metode til at isolere funktionel immunceller fra hjertet giver et alternativ til de konventionelle metoder collagenase fordøjelse, der forårsager uønsket immun celle aktivering, hvilket resulterer i en nedsat reaktionsevne af disse celler. Vores metode til isolation giver funktionelle hjertets immunceller ved at undgå problemer i forbindelse med enzymatisk fordøjelse.
Cardiac immunceller er stigende interesse for de roller, de spiller i den patologiske remodeling i mange hjertesygdomme 1-5 Disse immunceller, som omfatter mast celler, T-celler og makrofager;. Opbevare og frigive en række af biologisk aktive mediatorer, herunder cytokiner og proteaser, såsom tryptase. 6-8 Disse mæglere har vist sig at være centrale aktører i ekstracellulære matrix stofskifte ved at aktivere matrixmetalloproteinaser eller forårsager kollagen ophobning ved at modulere hjertefunktionen fibroblaster 'funktionen. 9-11 dog tilgængelige teknik til at isolere hjerte immunceller har været problematisk, fordi de bruger bakteriel collagenase at fordøje myokardiets væv. Denne teknik medfører aktivering af immunceller og dermed et tab af funktion. For eksempel bliver hjertets mastceller betydeligt mindre lydhøre over for stoffer, der forårsager degranulering. 12 Derfor har vi udviklet en teknik, der giver mulighed for than isolering af funktionelle hjerte immunceller, som ville føre til en bedre forståelse af den rolle, disse celler i hjertesygdom. 13, 14
Denne metode kræver et kendskab til de anatomiske placering af rottens formet som et sværd proces, armhulen og falciform ligament, og hjertesækken af hjertet. Disse milepæle er vigtigt at øge succesen af proceduren og for at sikre et højere udbytte af hjertets immunceller. Disse isolerede hjerte immunceller kan derefter bruges til karakterisering af funktionalitet, fænotype, modenhed, og co-kultur eksperimenter med andre hjerteceller at få en bedre forståelse af deres samspil.
Denne metode til at isolere hjerte immunceller muliggør en analyse af deres funktion, fænotype, og modenhed uden uønskede aktivering, der typisk opstår under en traditionel enzymatisk fordøjelse isolation teknik. Den gennemsnitlige samlede antal celler, der opnås med denne teknik er omkring 400.000 per rotte hjerte, og forskellen farvning og flowcytometri analyse af disse celler indikerer blandet befolkning af T-lymfocytter (~ 70%), makrofager (~ 12%) og mast celler med brugen af denne teknik. (~ 12%). 13, 14…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af en UNCF-Merck Graduate Science Research Dissertation Fellowship (JLM), National Heart, Lung, og Blood Institute giver RO1-HL-62228 (JSJ) og RO1-HL-073990 (JSJ).
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
HEPES | Sigma | H3784 | |
Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |