दिल से कार्यात्मक प्रतिरक्षा कोशिकाओं को अलग करने के लिए इस विधि collagenase पाचन, जो अवांछित प्रतिरक्षा सेल सक्रियण कारण बनता है, इन कोशिकाओं की एक कम प्रतिक्रिया में जिसके परिणामस्वरूप के पारंपरिक तरीकों के लिए एक विकल्प प्रदान करता है. हमारे अलगाव की विधि enzymatic पाचन के साथ जुड़ी समस्याओं से बचने के द्वारा कार्यात्मक हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं पैदावार.
कार्डिएक प्रतिरक्षा कोशिकाओं भूमिकाएं वे कई हृदय रोगों में रोग remodeling में खेलने के लिए ब्याज प्राप्त कर रहे हैं 1-5 इन प्रतिरक्षा कोशिकाओं है, जो मस्तूल कोशिकाओं, टी कोशिकाओं और मैक्रोफेज शामिल हैं, साइटोकिन्स और सहित biologically सक्रिय मध्यस्थों की एक किस्म की दुकान और रिहाई . tryptase जैसे proteases 6-8 इन मध्यस्थों. मैट्रिक्स metalloproteinases को सक्रिय या modulating हृदय 'fibroblasts समारोह द्वारा कोलेजन संचय के कारण द्वारा बाह्य मैट्रिक्स चयापचय में महत्वपूर्ण खिलाड़ी हो दिखाया गया है 9-11 हालांकि, हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं को अलग करने के लिए उपलब्ध तकनीक है. समस्याग्रस्त किया गया क्योंकि वे बैक्टीरियल collagenase का उपयोग करने के लिए दौरे के ऊतकों को पचाने. इस तकनीक प्रतिरक्षा कोशिकाओं के सक्रियण और इस प्रकार समारोह के नुकसान का कारण बनता है. उदाहरण के लिए, हृदय मस्तूल कोशिकाओं काफी कम यौगिकों कि degranulation के कारण के लिए उत्तरदायी बन जाते हैं 12. इसलिए, हम टी के लिए अनुमति देता है एक तकनीक है कि विकसितकार्यात्मक हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं जो हृदय रोग में इन कोशिकाओं की भूमिका का एक बेहतर समझ के लिए नेतृत्व करेंगे के अलगाव वह 13, 14
इस विधि चूहे असिरूप प्रक्रिया कांख, और दात्राकार बंधन के संरचनात्मक, स्थान, और दिल की pericardium के साथ एक परिचित की आवश्यकता है. इन स्थलों महत्वपूर्ण प्रक्रिया की सफलता को बढ़ाने के लिए और हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं के एक उच्च उपज सुनिश्चित. ये पृथक हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं तो कार्यक्षमता, phenotype, परिपक्वता, और अन्य हृदय कोशिकाओं के साथ सह संस्कृति प्रयोगों के लिए उनकी बातचीत का एक बेहतर समझ पाने के लक्षण वर्णन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं को अलग करने का यह तरीका अवांछित सक्रियण है कि आमतौर पर एक पारंपरिक enzymatic पाचन अलगाव तकनीक के दौरान होता है के बिना उनके कार्य, phenotype, और परिपक्वता के विश्लेषण के लिए सक्षम बनाता है. …
The authors have nothing to disclose.
यह काम UNCF – मर्क स्नातक विज्ञान अनुसंधान निबंध (JLM) फैलोशिप, राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े और रक्त संस्थान RO1 HL 62,228 अनुदान (JSJ) और RO1-HL-073,990 (JSJ) द्वारा समर्थित किया गया.
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
HEPES | Sigma | H3784 | |
Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |