कार्यात्मक कार्डिएक प्रतिरक्षा कोशिकाओं के अलगाव

Summary

दिल से कार्यात्मक प्रतिरक्षा कोशिकाओं को अलग करने के लिए इस विधि collagenase पाचन, जो अवांछित प्रतिरक्षा सेल सक्रियण कारण बनता है, इन कोशिकाओं की एक कम प्रतिक्रिया में जिसके परिणामस्वरूप के पारंपरिक तरीकों के लिए एक विकल्प प्रदान करता है. हमारे अलगाव की विधि enzymatic पाचन के साथ जुड़ी समस्याओं से बचने के द्वारा कार्यात्मक हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं पैदावार.

Abstract

कार्डिएक प्रतिरक्षा कोशिकाओं भूमिकाएं वे कई हृदय रोगों में रोग remodeling में खेलने के लिए ब्याज प्राप्त कर रहे हैं ^1-5 इन प्रतिरक्षा कोशिकाओं है, जो मस्तूल कोशिकाओं, टी कोशिकाओं और मैक्रोफेज शामिल हैं, साइटोकिन्स और सहित biologically सक्रिय मध्यस्थों की एक किस्म की दुकान और रिहाई . tryptase जैसे proteases ^6-8 इन मध्यस्थों. मैट्रिक्स metalloproteinases को सक्रिय या modulating हृदय 'fibroblasts समारोह द्वारा कोलेजन संचय के कारण द्वारा बाह्य मैट्रिक्स चयापचय में महत्वपूर्ण खिलाड़ी हो दिखाया ^गया है 9-11 हालांकि, हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं को अलग करने के लिए उपलब्ध तकनीक है. समस्याग्रस्त किया गया क्योंकि वे बैक्टीरियल collagenase का उपयोग करने के लिए दौरे के ऊतकों को पचाने. इस तकनीक प्रतिरक्षा कोशिकाओं के सक्रियण और इस प्रकार समारोह के नुकसान का कारण बनता है. उदाहरण के लिए, हृदय मस्तूल कोशिकाओं काफी कम यौगिकों कि degranulation के कारण के लिए उत्तरदायी ^{बन जाते} हैं 12. इसलिए, हम टी के लिए अनुमति देता है एक तकनीक है कि विकसितकार्यात्मक हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं जो हृदय रोग में इन कोशिकाओं की भूमिका का एक बेहतर समझ के लिए नेतृत्व करेंगे के अलगाव वह ^{13, 14}

इस विधि चूहे असिरूप प्रक्रिया कांख, और दात्राकार बंधन के संरचनात्मक, स्थान, और दिल की pericardium के साथ एक परिचित की आवश्यकता है. इन स्थलों महत्वपूर्ण प्रक्रिया की सफलता को बढ़ाने के लिए और हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं के एक उच्च उपज सुनिश्चित. ये पृथक हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं तो कार्यक्षमता, phenotype, परिपक्वता, और अन्य हृदय कोशिकाओं के साथ सह संस्कृति प्रयोगों के लिए उनकी बातचीत का एक बेहतर समझ पाने के लक्षण वर्णन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Protocol

1. 'हैंक्स बैलेंस नमक समाधान की तैयारी (HBSS) आटोक्लेव 1 एल कांच बीकर, 1000 एमएल सिलेंडर स्नातक की उपाधि प्राप्त की, और बार हलचल. Reconstitute autoclaved एल 1 गिलास 900 एमएल निशान दोहरा आसुत जल के साथ करने के लिए बीकर में HBSS…

Discussion

हृदय प्रतिरक्षा कोशिकाओं को अलग करने का यह तरीका अवांछित सक्रियण है कि आमतौर पर एक पारंपरिक enzymatic पाचन अलगाव तकनीक के दौरान होता है के बिना उनके कार्य, phenotype, और परिपक्वता के विश्लेषण के लिए सक्षम बनाता है. …

Materials

Name of Reagent and Equipment	Company	Catalogue Number	Comments
Hanks’ Balanced Salt	Sigma	H4891	One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure.
Antibiotic- Antimyotic	Gibco	15240-062
HEPES	Sigma	H3784
Bovine Serum Albumin	Sigma	A3912
250 mL Nalogene Filter Bottle	Thermoscientific	157-0020
12 N HCL	Fisher Scientific	CAS 7647-01-0	For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water.
10 N NaOH	Fisher Scientific	SC267	For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water.
Double Distilled Water

Table of Specific Equipment:

Name of Reagent and Equipment	Company	Catalogue Number	Comments
3-O Suture Silk Braided	Ethicon Products	SA64H
Small Animal Ventilator	CWE Incorporated	SAR-830	Set breathing rate to 40.5 breaths per min.
Bevel 18 gauge needle	BD Biosciences	305199	Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube.
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter	Baxter	2N111	Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4.
10 cc syringe	Fisher Scientific	14-823-16B
15 mL Falcon Tubes	BD Biosciences	352097
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge	Fisher Scientific	75-004-377	Remember to pre-cool and keep at 4°C.
Hyclone	Thermoscientific	S300030.02
Hemocytometer	Hausser Scientific	HS-LB-1483