Kanylering av Mouse submandibular spottkörteln via Whartons Duct
Summary
Ett protokoll för kanylering av musen submandibular spottkörteln via Whartons kanalen beskrivs. För det här experimentet är trypan blå lösning som används som en färgare för att visa hur denna teknik på ett effektivt sätt levererar infusioner i riktade körtel, och att föreslå tillförlitligheten av denna nya strategi som en möjlig klinisk läkemedelsutveckling / cellterapi för regenerering av spottkörtlarna.
Abstract
Svår salivkörtlarna underfunktion är ofta hos patienter med Sjögrens syndrom och de som fått terapeutiska bestrålning i sitt huvud och hals för cancerbehandling. Båda grupperna av patienter få symptom som muntorrhet (muntorrhet), dysfagi (försämrad tugga och svälja), svår karies, smakförändringar, oro och svalg infektioner (candida), mukosit, smärta och obehag.
En innovativ metod för regenerativ medicin för behandling av spottkörtlarna hypo-funktionen är spekulerats i RS Redman, E Mezey et al 2009:. Stamceller kan direkt deponeras av kanylering i körtel som en potent metod i att återuppliva de funktioner som nedsatt orgel. Förmodligen kommer de migrerade utländska stamceller differentieras till körtelceller att fungera som en del i den mottagande spottkörteln. Detta är också kanylering tekniken en ändamålsenlig och effektiv leverans metod för klinisk genöverföring ansökan.
Här illustrerar vi de olika stegen i att utföra kanylering proceduren på musen submandibular spottkörteln via Whartons kanalen (Fig 1). C3H möss (Charles River, Montreal, QC, Kanada) används för detta experiment, som har hållits under rent konventionella förhållanden vid McGill University djuret resurscentrum. Alla experiment har godkänts av universitetet Animal Care kommittén och var i enlighet med riktlinjerna för den kanadensiska rådet om Animal Care.
För detta experiment är en trypan blå lösning infunderas i körteln genom öppningen av Wharton kanalen med en insulin spruta med en 29-nål inneslutet i ett rör i polyetylen. Därefter är musen dissekeras för att visa att infusioner flyttade in i körteln framgångsrikt.
Protocol
Discussion
En svårighet med denna kanylering metod är att förhindra backflöde av den injicerade lösningen. Även om trypan blå lösning har tillfälligt flyttat in i spottkörteln framgångsrikt, kan saliv sekretion störa infusioner och orsaka backflöde av trypan blå lösningen ur körteln. Som en försiktighetsåtgärd, förutom att använda atropin som hämmar utsöndringen av saliv bör polyeten kanyl kvar i Whartons kanal och kolven i sprutan hålls för 60 sekunder efter infusioner har deponerats. Detta gör att de f…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Författarna är tacksamma att Dr Ana Cotrim för teknisk konsultation och till Dr Monzur Murshed för utrustning. Detta arbete har delvis finansierats av den kanadensiska Institutes for Health Research.
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Atropine | Drug | Fluka | 11330 | To inhibit saliva secretion |
| Ketamine | Drug | Phoenix Scientific | Sedation | |
| Xylazine | Drug | Phoenix Scientific | ||
| Polyethylene tubing (0.58 mm diameter) | Tube | Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems | 427410 | To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct. |
| Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle) | Syringe | Tyco Healthcare | 600145 | |
| 4% trypan blue | Stain | Gibco | 15250 |
References
- Fox, P. C. Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation. Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).
- Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment. Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).
- Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree. Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).
