生物物理检测探头相间细胞核的力学性能：基材应变的应用和微针操纵
Summary
我们现在两个独立的显微镜为基础的工具来衡量，在应对全球性或局部应变的应用单一，生活贴壁细胞诱导核和细胞骨架变形。这些技术被用于确定核刚度（即变形）和探测细胞内的细胞核和细胞骨架的之间的传力。
Abstract
在大多数真核细胞，细胞核是最大的细胞器，通常是2到10倍，比周围的细胞骨架的围追堵截，因此，原子核的物理性质，化学性质显着促进细胞生理和病理条件下的整体生物力学行为。例如，在中性粒细胞迁移和入侵的癌细胞，核刚度可以在外渗或通过狭窄的空间内组织的流逝带来的一大障碍。另一方面，机械活跃的组织，如肌肉细胞的细胞核，需要足够的结构支撑承受重复性的机械应力。重要的是，原子核是紧密集成到细胞结构，它是物理上连接到周围的骨架，这是关键的一个细胞核的细胞内运动和定位的要求，例如，在极化的细胞，在神经肌肉接头的突触核，或在细胞迁移。毫不奇怪，如lamins和nesprins，从而起到了关键作用，在确定核刚度和核苷酸骨架耦合的核衣壳蛋白的基因突变，已显示最近导致的人类疾病，包括金刚砂德赖富斯肌营养不良，肢带型肌营养不良症，和扩张型心肌病。探讨生物物理功能多样的核衣壳蛋白和特定的突变的影响，我们已开发的实验方法来研究原子核的物理性质，化学性质，在单，活细胞受到全球或局部的机械扰动。正是适用于基板应变的应用测量诱发核变形，细胞核变形产生重要的信息，并允许不同的突变或缺乏具体的核衣壳蛋白的细胞株之间的定量比较。用微针骨架应变本地化应用程序，是用来补充这个实验中，细胞内的细胞核和细胞骨架的之间的传力可以产生更多的信息。完整的活体细胞的核力学研究，保持正常的细胞内结构和避免潜在的孤立核工作时可能出现的文物。此外，基板应变的应用程序提供了一个很好的模式，在肌肉细胞或其他组织（例如，血管平滑肌细胞暴露血管应变）所经历的生理应激。最后，而这些工具已经被开发，主要研究核力学，他们也可以被应用于研究细胞骨架蛋白和mechanotransduction信号的功能。
Protocol
Discussion
基板应变检测
应变的应用我们和其他团体已经成功地用于研究诱导核细胞受机械应力的变形，并探讨具体的核衣壳蛋白的核刚度的贡献。4-8这种技术的优点是，它探针的机械性能生活在正常的细胞和细胞骨架的环境和核基板应变程序类似于生理负荷的应用程序，如发现在许多组织，如承包肌肉或血管壁。9此外，它使许多细胞的应变应用程序并行，增加的数量在?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是支持的美国国立卫生（R01 HL082792和R01 NS059348）和布里格姆与妇女医院心血管领导小组奖研究院。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue number |
| Fibronectin | Millipore | FC010 |
| MitoTracker Red FM and Green FM | Invitrogen | M22425 and M-7514 |
| Hoechst 33342 | Invitrogen | H3570 |
| Hank’s Buffered Salt Saline | Invitrogen | 14185 |
| Phenol free, DMEM | Invitrogen | 21063 |
| Fetal bovine serum | Aleken Biologicals | FBSS500 |
| Penicillin/Streptomycin | Sigma | P0781-100ML |
| Borosilicate Glass with filament | Sutter Instrument | BF100-78-10 |
| Gloss/Gloss non-reinforced silicone sheeting, 0.005″ | Specialty Manufacturing Inc. | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14200 |
| 35 mm glass bottom culture dishes (FluoroDish) | World Precision Instruments, INC | FD35-100 |
| Braycote 804 Vacuum Grease | Spi supplies | 05133A-AB |
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